pcr儀溫度校準(zhǔn)裝置、基因擴(kuò)增儀(PCR儀)測溫系統(tǒng)校準(zhǔn)裝置,PCR儀溫度檢定系統(tǒng),PCR儀設(shè)備校準(zhǔn) 基因擴(kuò)增儀(PCR儀)測溫系統(tǒng)校準(zhǔn)規(guī)范
一、 引言
PCR是聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction)的簡稱，是在短時(shí)間內(nèi)體外大量擴(kuò)增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)。自動完成聚合酶鏈反應(yīng)，提供DNA 擴(kuò)增的溫度條件而設(shè)計(jì)的儀器稱為PCR儀。
   PCR儀主要用于DNA片段的放大，可將DNA分子或某一DNA片段于數(shù)小時(shí)內(nèi)擴(kuò)增至十萬乃至百萬倍，在這過程中主要是3個特征溫度循環(huán)：
1． 高溫變性：把樣品加熱至90～95℃讓DNA模板變性變成單鏈。
2． 低溫退火：讓樣品的溫度迅速下降至50～65℃,引物就可以結(jié)合到模板上去。
3． 適溫延伸：讓樣品的溫度上升至70～75℃,DNA聚合酶就可以從引物開始用底物復(fù)制出新鏈。
因此，在PCR反應(yīng)過程中對溫度控制的要求很高，良好的溫度控制是PCR儀質(zhì)量好壞的關(guān)鍵。
二、PCR基因擴(kuò)增儀校準(zhǔn)的現(xiàn)狀
PCR儀的控溫精度、升降溫速率以及溫場的均勻性等直接影響DNA片段擴(kuò)增的結(jié)果。PCR儀經(jīng)使用后，其溫度傳感器的計(jì)量特性會發(fā)生變化，作為計(jì)量設(shè)備一般須經(jīng)定期校準(zhǔn)后方能繼續(xù)使用。
幾乎進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)試驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室（如基因判別、親子鑒定、DNA個體識別）都會使用多臺擴(kuò)增儀以滿足實(shí)驗(yàn)需求。而且，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的基因擴(kuò)增儀都是常開常用，使用頻率高，很難保證其性能指標(biāo)符合實(shí)驗(yàn)要求。各實(shí)驗(yàn)室對PCR儀的質(zhì)量控制還停留在自檢自校和依賴于廠商的售后支持。
三、 PCR儀溫度校準(zhǔn)的項(xiàng)目及必要性
一個穩(wěn)定的溫度循環(huán)是成功實(shí)現(xiàn)PCR所必需的。其中溫度控制的動、穩(wěn)態(tài)特性是影響PCR擴(kuò)增結(jié)果正確與否的最重要因素之一, 這包括溫度準(zhǔn)確性、升降溫速度、溫場均勻性
（一）、溫度準(zhǔn)確性
溫度準(zhǔn)確性是PCR儀最重要的性能指標(biāo)，如溫度準(zhǔn)確性低可直接造成非特異性擴(kuò)增，甚至是錯誤的擴(kuò)增結(jié)果，造成假陽性和假陰性。
市場上各家廠商考核基因擴(kuò)增儀（PCR儀）性能的主要指標(biāo)，一般廠家的企業(yè)指標(biāo)為±0.5℃，一些性能較好的產(chǎn)品可以實(shí)現(xiàn)的溫度準(zhǔn)確度為±0.3℃。故需對PCR儀控溫準(zhǔn)確度進(jìn)行測試。
   校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)平均溫度的計(jì)算公式為：I—參加檢測的溫度探頭序號；n—參加檢測的溫度探頭的數(shù)量
（二）、溫場均勻性
   由于PCR儀加熱器加熱不均勻，導(dǎo)致PCR儀模塊上各孔存在一定溫差。造成試驗(yàn)結(jié)果偏差。一般PCR儀邊緣點(diǎn)的溫度低于中間區(qū)域，所以均勻性為PCR儀重要的性能指標(biāo)。一般廠家的企業(yè)指標(biāo)規(guī)定均勻性為±0.5℃，一些性能較好的產(chǎn)品可以實(shí)現(xiàn)的溫度均勻度為±0.3℃。
   校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)時(shí)，通過選取孔板中16個特殊反應(yīng)位置來測量溫度，并得出孔板的溫度均勻性。均勻性為各個探頭在同一時(shí)溫度與最小溫度的差值。均勻度計(jì)算公式為：t_max-t_min  （t_max =溫度；t_min =最小溫度）
（三）、升降溫速率
PCR擴(kuò)增產(chǎn)物數(shù)量的多少決定了PCR的效率。為了在短時(shí)間內(nèi)獲得盡可能多的產(chǎn)物，需要儀器在升降溫段具有按照預(yù)設(shè)升降溫速率快速升溫和降溫的能力（升溫速率達(dá)15~20℃）。一個完整的PCR過程，是由若干個升溫→恒溫→降溫循環(huán)構(gòu)成的。因?yàn)椤白冃浴?，“退火”和“延伸?個階段是必須要保證的。因此，只有使升降溫的過程盡可能地迅速，才能縮短每個PCR循環(huán)以及整個PCR 過程所需時(shí)間。一般廠家的企業(yè)指標(biāo)規(guī)定升溫速率為±3℃/sec。
儀器校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)時(shí)，升溫速率為溫度從40℃到90℃的時(shí)間；降溫速率為溫度從70℃到35℃的時(shí)間。
（四）、超調(diào)溫度
   當(dāng)溫度從一定點(diǎn)溫度調(diào)節(jié)到另一定點(diǎn)溫度,就會產(chǎn)生溫度的超調(diào)。超調(diào)溫度過大同樣會對試驗(yàn)產(chǎn)生影響，所以校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)時(shí)，需要計(jì)算超調(diào)溫度和平均超調(diào)溫度。
四、解決方案
根據(jù)基因擴(kuò)增儀(PCR儀)測溫系統(tǒng)校準(zhǔn)規(guī)范的要求，我們公司推出了PCR儀溫度檢定系統(tǒng),PCR儀設(shè)備校準(zhǔn) 來校準(zhǔn)pcr儀。
具體方案 精密測溫儀+恒溫槽+標(biāo)準(zhǔn)熱敏電阻