注：本公司提供試劑盒免費(fèi)代測(cè)服務(wù)。需要其他Elisa試劑盒請(qǐng)咨詢銷售人員。

試劑盒組成及試劑配制 ：

1. 酶聯(lián)板（Assay plate ）：一塊（96孔）。

2. 標(biāo)準(zhǔn)品（Standard）：2瓶（凍干品）。

3. 樣品稀釋液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。

4. 標(biāo)記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。

5. 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。

6. 標(biāo)記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）

7. 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）

8. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。

9. 濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。

10. 終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

試劑和樣本的控制方法：

一、試劑

1.試劑的選擇：國(guó)家明確要求要采用批批檢定的形式對(duì)ELISA試劑嚴(yán)格把關(guān)，我司嚴(yán)格按照進(jìn)行，已獲得國(guó)家承認(rèn)的“三證”，每一個(gè)產(chǎn)品都有對(duì)應(yīng)的批號(hào)，只要客戶提前下單，我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品，不必?fù)?dān)心會(huì)有過期的試劑。我司的試劑，值得您選擇。

2.試劑的準(zhǔn)備：先將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20-30 min后，再進(jìn)行測(cè)定，使試劑盒在使用前與室溫平衡，這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所需的溫度，以滿足后面的測(cè)定需求。

二、樣本

1.內(nèi)源性干擾因素：包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等；

類風(fēng)濕因子的控制方法：

①用F(ab)2替代完整的IgG；

②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理；

③檢測(cè)抗原時(shí)，可用加入到標(biāo)本稀釋液中使RF降解。

ELISA 試驗(yàn)時(shí)，注意事項(xiàng)如下：

1. 正式試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)分別以陽性對(duì)照與陰性對(duì)照控制試驗(yàn)條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時(shí)本底較高，說明有非特異性反應(yīng)，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。

2. 在ELISA中，進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的，其中包括:

（1） 固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。

（2） 包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時(shí)，要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg／ml等）進(jìn)行包被后，在其它試驗(yàn)條件相同時(shí)，觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值z(mì)ui大而蛋白量zui少的濃度。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg／ml。

（3） 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定（見酶標(biāo)記抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。

（4） 酶的底物及供氫體的選擇：對(duì)供氫體的選擇要求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時(shí)間后，應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入 。

Phospho-Ack1     磷酸化Ack1抗體

phospho-AMPK alpha-1    磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α1抗體

phospho-AMPK beta 1     磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶β1抗體

phospho-ALK     磷酸化間變型淋巴瘤激酶抗體

phospho-ATM    磷酸化毛細(xì)血管擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)癥突變蛋白抗體

phospho-ATP citrate lyase     磷酸化三磷酸腺檸檬酸裂解酶抗體

phospho-ATR     磷酸化ATR抗體

AMN1    細(xì)胞核重定位及紡錘體檢查點(diǎn)蛋白AMN1抗體

ALG11    天連接糖基化11抗體

ASF1A    細(xì)胞衰老相關(guān)蛋白ASF1A抗體

AGPHD1    氨基糖苷類磷酸結(jié)構(gòu)域蛋白抗體

ASGPR1    唾液酸糖蛋白受體1抗體

ARSF    芳香基硫酸酯酶F抗體

AKAP5    A激酶錨定蛋白5抗體

ATXN3L    小腦脊髓共濟(jì)失調(diào)蛋白3抗體

ASTE1    ASTE1蛋白抗體

phospho-APG4B    磷酸化自噬相關(guān)蛋白4B抗體

AFAP    微絲相關(guān)蛋白1抗體

ADORA1    腺苷A1A受體抗體

ARSB    芳基硫酸酯酶B抗體

OxLDL豬氧化低密度脂蛋白檢測(cè)試劑盒    OxLDL ELISA Kit

PDGF豬血小板衍生生長(zhǎng)因子檢測(cè)試劑盒    PDGF ELISA Kit

PAF豬血小板活化因子檢測(cè)試劑盒    PAF ELISA Kit

FDP豬血纖蛋白原降解產(chǎn)物檢測(cè)試劑盒    FDP ELISA Kit

TXA2豬血栓素A2檢測(cè)試劑盒    TXA2 ELISA Kit

TM豬血栓調(diào)節(jié)蛋白檢測(cè)試劑盒    TM ELISA Kit

KLKB1豬血漿測(cè)試劑盒    KLKB1 ELISA Kit

Hb豬血紅蛋白檢測(cè)試劑盒    Hb ELISA Kit

VWF豬血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子檢測(cè)試劑盒    vWF ELISA Kit

BK豬血管舒緩激肽檢測(cè)試劑盒    BK ELISA Kit

ANG-2豬血管生成素2檢測(cè)試劑盒    Porcine ANG-2 ELISA Kit

ANG-1豬血管生成素1檢測(cè)試劑盒    Porcine ANG-1 ELISA Kit

VCAM-1豬血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1檢測(cè)試劑盒    VCAM-1 ELISA Kit

t-PA豬組織型纖溶酶原激活劑檢測(cè)試劑盒VEGF豬血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子檢測(cè)試劑盒    VEGF ELISA KIT

VE-cad豬血管內(nèi)皮鈣粘著蛋白復(fù)合體檢測(cè)試劑盒    VE-cad ELISA Kit

ACE2豬血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2檢測(cè)試劑盒    ACE2 ELISA Kit

ACE豬血管緊張素轉(zhuǎn)化酶檢測(cè)試劑盒    ACE ELISA Kit

ANG-Ⅱ豬血管緊張素Ⅱ檢測(cè)試劑盒    ANG-Ⅱ ELISA Kit

操作流程：

1待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。

2酶標(biāo)板置4℃，包被過夜。

3洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍將洗滌液注滿板孔后，即甩去，之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。

4陰性對(duì)照孔每孔加入pbs 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人aif抗體工作液50μl。

5酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。

6洗板，同4。

7每孔加1:5000稀釋的hrp-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。

8酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。

9洗板，同4。

10每孔加tmb顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。

11每孔加100μl 2mol/l h2so4終止反應(yīng)。

12分別測(cè)450nm 吸光值w1和630nm吸光值w2，終測(cè)得的od值為兩者之差w1-w2，以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。

13數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本s和陰性對(duì)照n的 od值后，計(jì)算s/n值。s/n≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。