- 簡介
Protein Maker是美國Protein Biosolutions公司研發(fā)的高通量蛋白純化系統(tǒng)。該系統(tǒng)解決了目前蛋白純化的瓶頸,可同時進(jìn)行24個蛋白樣品的純化實驗,具有高通量,全自動,可編程等特點,滿足不同用戶對于不同類型蛋白的純化要求。
Protein Maker高通量蛋白純化系統(tǒng)可添加24個獨立的純化柱,每一個都有自己的緩沖液體系(平衡緩沖液A,洗滌緩沖液B,洗脫緩沖液和水)。Protein Maker結(jié)合24個精密的注射泵,每一個注射泵都有9個通路,可以實現(xiàn)不同緩沖液吸棄和快速切換。
Protein Maker高通量蛋白純化系統(tǒng)具有24個高分辨的UV檢測器,能夠幫助研究人員判定蛋白的洗脫效果,確定蛋白的種類并進(jìn)行蛋白的精確定量。
板架上有20個位置,用于放置SBS板或架??梢杂糜跇悠返难b載,也可用于專用洗滌緩沖液等的載入。
圖2:Protein Maker板架
適用于高通量蛋白質(zhì)組學(xué)實驗室中蛋白純化
· 平行蛋白色譜法
· 24個平行的純化
–Production Mode(24個不同的蛋白樣品,1種類型的色譜柱
– Scouting Mode(24個不同的色譜柱,一種蛋白樣品)
–Complex Purification Mode(多步純化)
· 可以運行24個色譜柱(0.1~10mL)
· 全自動操作
· 廣泛的樣本容量—0.5mL到250mL樣本容量
· 自定義應(yīng)用程序
Protein Maker™軟件和使用界面(下圖)
點擊用戶界面允許操作者選擇不同的柱或改變參數(shù)用于自動化的操作,也可以進(jìn)行手動的抽吸和分配操作。從開始到結(jié)束,Protein Maker™運行24個不同的1mL柱需要大約一小時。其中包括個別調(diào)整反應(yīng)梯度(開始時輸入24-10mL蛋白樣品)
· 選擇操作方法和循環(huán)數(shù)
· 設(shè)置每一次操作的流量
· 選擇平衡和洗滌的循環(huán)數(shù)
· 設(shè)置每一板的體積和洗滌劑的組分
· *自動化的控制每一個泵、閥門和管架的位置
應(yīng)用
? 250mL初始體積中進(jìn)行抗體純化(蛋白A親和色譜法)
? 使用免疫損耗樹脂進(jìn)行質(zhì)譜檢測中樣品的準(zhǔn)備和生物標(biāo)記物的發(fā)現(xiàn)(血漿和腦脊髓液)
? (表面)誘導(dǎo)蛋白構(gòu)建的平行表達(dá)和純化檢測( Ni-chelate chromatography)
? 24蛋白質(zhì)樣品可以平行處理,蛋白質(zhì)產(chǎn)量可以足夠用于大量的分析實驗
圖4:使用Protein Maker應(yīng)用全自動兩步IMAC純化模式純化的蛋白進(jìn)行SDS-PAGE分析。
圖5: 樣品從粗E.coli重提取,包括His6x-tagged重組蛋白,通過6個單獨的IMAC柱同時運行兩次(頂部)。Protein Maker™平行運行的12種不同的蛋白突變的SDS-PAGE分析。從純化的蛋白中發(fā)現(xiàn)兩種新的結(jié)晶形式(低于200次的結(jié)晶實驗)(底部)。