六胺銀染色實驗代測
六胺銀染色簡介:
六胺銀染色是一種經(jīng)典顯示基底膜的方法。經(jīng)過改良之后,組織經(jīng)鉻酸氧化,使真菌內(nèi)的黏多糖暴露出醛基,醛基把六胺銀還原為黑色的金屬銀。氯化金可使金屬銀轉(zhuǎn)變?yōu)楦€(wěn)定的金屬金,同時使背景更清晰。海波可以固定并洗去未還原的銀離子。
六胺銀染色實驗步驟(僅供參考):
1、六胺銀固定于甲醛固定液中,常規(guī)脫水包埋。切片4微米,脫蠟至水洗。
2、切片入氧化劑氧化20分鐘。流水稍洗。
3、入漂白液處理1分鐘,以除去氧化劑。
4、流水沖洗5分鐘,蒸餾水浸洗2次,每次30秒至60秒。
5、切片放入配制好的預(yù)熱至60度的六胺銀工作液中,加蓋60度恒溫染色大約20至60分鐘,切片呈淡黃色即取出經(jīng)水洗后顯微鏡觀察是否有菌體出現(xiàn)。如有淡棕色菌體出現(xiàn),應(yīng)每隔5到10分鐘觀察一次以控制菌體著色深淺,直至顯色理想;
6、入蒸餾水中清洗。
7、用氯化金溶液調(diào)色1到2分鐘。蒸餾水洗1到2分鐘。
8、置于海波溶液2分鐘。流水沖洗5分鐘。
9、滴加橙黃G一小滴復(fù)染1秒即用水沖洗。染色時間不能過長,否則將影響最終效果。
10、流水沖洗20秒-60秒。
11、常規(guī)脫水,二甲苯透明,中性樹膠封固。染色完成。
染色結(jié)果:真菌黑色,背景淺紅色
六胺銀染色實驗代測