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1765半微量凱氏定氮法/微量凱氏定氮蒸餾裝置/1765半微量定氮蒸餾器

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  • 公司名稱天長市華玻實驗儀器廠
  • 品       牌
  • 型       號
  • 所  在  地滁州市
  • 廠商性質其他
  • 更新時間2024/1/27 12:06:09
  • 訪問次數(shù)153
產品標簽:

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 天長市華玻實驗儀器廠(原天長市長城玻璃儀器制造廠)位于長江之濱的皖東明珠——天長市。東臨揚州與南京接壤。本廠是國內專業(yè)制造優(yōu)質,非標,復雜型玻璃儀器的廠家,已有25年生產經(jīng)驗,在國內及周邊地區(qū)玻璃儀器行業(yè)有著很好的口碑,本廠為了達到進口質量與外觀,與國外儀器生產商合作并不惜重金購買德國HB-C20全自動玻璃機床2臺,高薪聘用技術過硬的工程師數(shù)名,這些技術人才,具有非標模具設計及開發(fā)的能力,制造工藝的創(chuàng)新,機床的操作技能及國外加工的理念,另外我們對玻璃選材及厚度,清洗,包裝,一些細節(jié)也十分苛刻。由于質量過關和服務到位,一直為國內科研單位服務和名氣較好的玻璃儀器同行代加工,也為國外客戶生產了大批優(yōu)質玻璃儀器。有的非標玻璃儀器難度性較高,得到了業(yè)內人士的認可和較高的評價?! ‘斍捌髽I(yè)特征如下:  1:生產以燈工和玻璃車床相結合為主,從而解決了大容量,大口徑玻璃加工的困難以及玻璃產品的制作需要,為各科研單位生產,要求較高,復雜性程度高的玻璃成套儀器?! ?:在使用原材料上,以優(yōu)良石英玻璃和高硼硅玻璃兩種,高硼硅玻璃其線膨脹系數(shù)a=33*10-7/c.mm是目前理化性能較好的耐熱  玻璃,而且與國際上實驗室耐熱玻璃“派力克司”接了軌,石英玻璃由于耐溫高達1200度左右,廣泛用于特殊行業(yè)。 3:專用儀表的生產及CP安裝。(已正常批量生產)  4:大規(guī)格及復雜性有機玻璃制品的加工?! ?:PTFE優(yōu)良料加工部件,容器,氣體接頭?! ?:成套儀器及設備。玻璃蒸餾器及不銹鋼蒸餾器的生產及開發(fā)!  8:整臺奧氏氣體分析儀系列,羅氏泡沫儀系列,穿孔萃取儀系列,真空儀表系列,環(huán)保儀器系列,水泥儀器系列等?! ?:玻璃+聚四氟乙烯制品,玻璃+鋁制品,玻璃+不銹鋼制品,玻璃+木制品的成套儀器生產和開發(fā)?! ?0:代理廠商的產品:電子天平,儀表,化驗設備,橡膠制品,聚四氟乙烯制品?! ”緩S諾言:守信譽,重合同,以較好的質量和完善的售后服務竭誠為各行業(yè)的實驗室服務。
【詳細說明】蛋白質的定量測定(一)--凱氏定氮法目的要求(1)學習微量凱氏定氮法的原理
1765半微量凱氏定氮法/微量凱氏定氮蒸餾裝置/1765半微量定氮蒸餾器 產品信息

【詳細說明】

蛋白質的定量測定(一)-- 凱氏定氮法

目的要求

(1)學習微量凱氏定氮法的原理。

(2)掌握微量凱氏定氮法的操作方法。

實驗原理

生物材料的含氮量測定在生物化學研究中具有一定的意義,如蛋白質的含氮量約為16%,測出含氮量則可推知蛋白含量。生物材料總氮量的測定,通常采用微量凱氏定氮法。凱氏定氮法由于具有測定準確度高,可測定各種不同形態(tài)樣品等兩大優(yōu)點,因而被為是測定食品、飼料、種子、生物制品、藥品中蛋白質含量的標準分析方法。其原理如下:

1. 消化:有機物與濃硫酸供熱,使有機氮全部轉化為無機氮——硫酸銨。為加快反應,添加硫酸銅和硫酸鉀的混合物;前者為催化劑,后者可提高硫酸沸點。這一步約需30min至1h,視樣品的性質而定。

2. 加堿蒸餾:硫酸銨與NaOH(濃)作用生成(NH4)OH, 加熱后生成NH3, 通過蒸餾導入過量酸中和生成NH4Cl而被吸收。

3. 滴定:用過量標準HCl吸收NH3,剩余的酸可用標準NaOH滴定,由所用HCl摩爾數(shù)減去滴定耗去的NaOH摩爾數(shù),即為被吸收的NH3摩爾數(shù)。此法為回滴法,采用甲基紅衛(wèi)指示劑。HCl+NaOHNaCl +H2O

本法適用于0.2 ~ 2.0 mg的氮量測定。

1.熱源 2. 燒瓶 3. 玻璃管 4. 橡皮管5.玻璃杯 6. 棒狀玻塞 7. 反應室 8. 反應室外殼 9. 夾子 10. 反應室中插管 11. 冷凝管 12. 錐形瓶 13. 石棉網(wǎng)

 

圖3.4 微量凱氏蒸餾裝置示意圖

 試劑和器材

一、試劑

濃硫酸;30%;10 M氫氧化鈉;0.01M的標準鹽酸;標準硫酸銨(0.3mg氮/mL)。

催化劑:硫酸銅:硫酸鉀=1:4混合,研細。

指示劑:0.1%甲基紅乙醇溶液。

二、測試樣品

牛血清白蛋白。

三、器材

微量凱氏定氮儀;移液管1mL(×3);2mL(×1);微量滴定管5mL(×1); 燒杯200mL(×2);量筒10mL(×1);三角燒瓶150mL(×4);凱氏燒瓶50mL(×4),吸耳球(×1);電爐;分析天平。

操作方法

一、樣品處理

稱取牛血清白蛋白50mg,加入2個凱氏燒瓶中,另2個凱氏燒瓶為空白對照,不加樣品。分別在每個凱氏燒瓶中加入約500mg硫酸鉀-硫酸銅混合物,再加5 mL濃硫酸。

二、消化

將以上4個凱氏燒瓶置于通風櫥中電爐上加熱。在消化開始時應控制火力,不要使液體沖到瓶頸。待瓶內水汽蒸完,硫酸開始分解并放出SO2白煙后,適當加強火力,繼續(xù)消化,使瓶內液體微微沸騰,大約維持2 ~ 3h。待消化液變成褐色后,為了加速完成消化,可將燒瓶取下,稍冷,將30%1 ~ 2滴加到燒瓶底部消化液中,再繼續(xù)消化,直到消化液由淡黃色變成透明淡藍綠色,消化即告完成。冷卻后將瓶中的消化液倒入50mL容量瓶中,并以蒸餾水洗滌燒瓶數(shù)次,將洗液并入容量瓶中,定容備用。

三、蒸餾

1. 蒸餾器的洗滌

蒸氣發(fā)生器中盛有加有數(shù)滴H2SO4的蒸餾水和數(shù)粒沸石。加熱后,產生的蒸汽經(jīng)貯液管、反應室至冷凝管,冷凝液體流入接受瓶。每次使用前,需用蒸汽洗滌10分鐘左右(此時可用一小燒杯承接冷凝水)。將一只盛有5mL 2%硼酸液和1 ~ 2滴指示劑的錐形瓶置于冷凝管下端,使冷凝管管口插入液體中,繼續(xù)蒸餾1 ~ 2分鐘,如硼酸液顏色不變,表明儀器已洗凈。

2. 消化樣品及空白的蒸餾

取50mL 錐形瓶數(shù)個,各加25mL 0.01M標準HCl和1 ~ 2滴指示劑,用表面皿覆蓋備用。

取2mL 稀釋消化液,由小漏斗加入反應室。將一個裝有0.01M標準HCl和指示劑的錐形瓶放在冷凝管下,使冷凝器管口下端浸沒在液體內。

用小量筒量取5mL 10M NaOH溶液,倒入小漏斗,讓NaOH溶液緩慢流入反應室。尚未盡時,加緊夾子,向小漏斗加入約5mL蒸餾水,同樣緩緩放入反應室,并留少量水在漏斗內作水封。加熱水蒸氣發(fā)生器,沸騰后,關閉收集器活塞。使蒸汽沖入蒸餾瓶內,反應生成的NH3逸出被吸收。待氨已蒸餾,移動錐形瓶使液面離開冷凝管口約1cm,并用少量蒸餾水冷凝管口。取下錐形瓶,以0.01M NaOH標準溶液滴定。記下所耗去的體積。

3. 蒸餾后蒸餾器的洗滌

蒸餾完畢后,移取熱源,夾緊蒸汽發(fā)生器和收集器間的橡皮管,此時由于收集器溫度突然下降,即可將反應室殘液吸至收集器。

  • 標準樣品的測定

在蒸餾樣品及空白前,為了練習蒸餾和滴定操作,可用標準硫酸銨試做實驗2 ~ 3次。

標準硫酸銨的含氮量是0.3mg/mL,每次實驗取2.0mL。

四、計算

樣品的含氮量(mg/mL)=

 

若測定的蛋白質含氮部分只是蛋白質(如血清),則:

 

樣品中蛋白質含量(mg/mL)=

 

式中:A為滴定空白用去的NaOH平均mL數(shù),B為滴定樣品用去的NaOH平均mL數(shù),V為樣品的mL數(shù),0.01 NaOH的摩爾濃度,14為氮的原子量,6.25為系數(shù)(蛋白質的平均含氮量為16%,由凱氏定氮法測出含氮量,再乘以系數(shù)6.25即為蛋白質量),N為樣品的稀釋倍數(shù)。

注意事項

(1)必須仔細檢查凱氏定氮儀的各個連接處,保證不漏氣。

(2)凱氏定氮儀必須事先反復清洗,保證潔凈。

(3)小心加樣,切勿使樣品沾污口部、頸部。

(4)消化時,須斜放凱氏燒瓶(45o左右)。火力先小后大,避免黑色消化物濺到瓶口、瓶頸壁上。

(5)蒸餾時,小心加入消化液。加樣時將火力擰小或撤去。蒸餾時,切記火力不穩(wěn),否則將發(fā)生倒吸現(xiàn)象。

(6)蒸餾后應及時清洗定氮儀。

【詳細說明】

蛋白質的定量測定(一)-- 凱氏定氮法

目的要求

(1)學習微量凱氏定氮法的原理。

(2)掌握微量凱氏定氮法的操作方法。

實驗原理

生物材料的含氮量測定在生物化學研究中具有一定的意義,如蛋白質的含氮量約為16%,測出含氮量則可推知蛋白含量。生物材料總氮量的測定,通常采用微量凱氏定氮法。凱氏定氮法由于具有測定準確度高,可測定各種不同形態(tài)樣品等兩大優(yōu)點,因而被為是測定食品、飼料、種子、生物制品、藥品中蛋白質含量的標準分析方法。其原理如下:

1. 消化:有機物與濃硫酸供熱,使有機氮全部轉化為無機氮——硫酸銨。為加快反應,添加硫酸銅和硫酸鉀的混合物;前者為催化劑,后者可提高硫酸沸點。這一步約需30min至1h,視樣品的性質而定。

2. 加堿蒸餾:硫酸銨與NaOH(濃)作用生成(NH4)OH, 加熱后生成NH3, 通過蒸餾導入過量酸中和生成NH4Cl而被吸收。

3. 滴定:用過量標準HCl吸收NH3,剩余的酸可用標準NaOH滴定,由所用HCl摩爾數(shù)減去滴定耗去的NaOH摩爾數(shù),即為被吸收的NH3摩爾數(shù)。此法為回滴法,采用甲基紅衛(wèi)指示劑。HCl+NaOHNaCl +H2O

本法適用于0.2 ~ 2.0 mg的氮量測定。

1.熱源 2. 燒瓶 3. 玻璃管 4. 橡皮管5.玻璃杯 6. 棒狀玻塞 7. 反應室 8. 反應室外殼 9. 夾子 10. 反應室中插管 11. 冷凝管 12. 錐形瓶 13. 石棉網(wǎng)

 

圖3.4 微量凱氏蒸餾裝置示意圖

 試劑和器材

一、試劑

濃硫酸;30%;10 M氫氧化鈉;0.01M的標準鹽酸;標準硫酸銨(0.3mg氮/mL)。

催化劑:硫酸銅:硫酸鉀=1:4混合,研細。

指示劑:0.1%甲基紅乙醇溶液。

二、測試樣品

牛血清白蛋白。

三、器材

微量凱氏定氮儀;移液管1mL(×3);2mL(×1);微量滴定管5mL(×1); 燒杯200mL(×2);量筒10mL(×1);三角燒瓶150mL(×4);凱氏燒瓶50mL(×4),吸耳球(×1);電爐;分析天平。

操作方法

一、樣品處理

稱取牛血清白蛋白50mg,加入2個凱氏燒瓶中,另2個凱氏燒瓶為空白對照,不加樣品。分別在每個凱氏燒瓶中加入約500mg硫酸鉀-硫酸銅混合物,再加5 mL濃硫酸。

二、消化

將以上4個凱氏燒瓶置于通風櫥中電爐上加熱。在消化開始時應控制火力,不要使液體沖到瓶頸。待瓶內水汽蒸完,硫酸開始分解并放出SO2白煙后,適當加強火力,繼續(xù)消化,使瓶內液體微微沸騰,大約維持2 ~ 3h。待消化液變成褐色后,為了加速完成消化,可將燒瓶取下,稍冷,將30%1 ~ 2滴加到燒瓶底部消化液中,再繼續(xù)消化,直到消化液由淡黃色變成透明淡藍綠色,消化即告完成。冷卻后將瓶中的消化液倒入50mL容量瓶中,并以蒸餾水洗滌燒瓶數(shù)次,將洗液并入容量瓶中,定容備用。

三、蒸餾

1. 蒸餾器的洗滌

蒸氣發(fā)生器中盛有加有數(shù)滴H2SO4的蒸餾水和數(shù)粒沸石。加熱后,產生的蒸汽經(jīng)貯液管、反應室至冷凝管,冷凝液體流入接受瓶。每次使用前,需用蒸汽洗滌10分鐘左右(此時可用一小燒杯承接冷凝水)。將一只盛有5mL 2%硼酸液和1 ~ 2滴指示劑的錐形瓶置于冷凝管下端,使冷凝管管口插入液體中,繼續(xù)蒸餾1 ~ 2分鐘,如硼酸液顏色不變,表明儀器已洗凈。

2. 消化樣品及空白的蒸餾

取50mL 錐形瓶數(shù)個,各加25mL 0.01M標準HCl和1 ~ 2滴指示劑,用表面皿覆蓋備用。

取2mL 稀釋消化液,由小漏斗加入反應室。將一個裝有0.01M標準HCl和指示劑的錐形瓶放在冷凝管下,使冷凝器管口下端浸沒在液體內。

用小量筒量取5mL 10M NaOH溶液,倒入小漏斗,讓NaOH溶液緩慢流入反應室。尚未盡時,加緊夾子,向小漏斗加入約5mL蒸餾水,同樣緩緩放入反應室,并留少量水在漏斗內作水封。加熱水蒸氣發(fā)生器,沸騰后,關閉收集器活塞。使蒸汽沖入蒸餾瓶內,反應生成的NH3逸出被吸收。待氨已蒸餾,移動錐形瓶使液面離開冷凝管口約1cm,并用少量蒸餾水冷凝管口。取下錐形瓶,以0.01M NaOH標準溶液滴定。記下所耗去的體積。

3. 蒸餾后蒸餾器的洗滌

蒸餾完畢后,移取熱源,夾緊蒸汽發(fā)生器和收集器間的橡皮管,此時由于收集器溫度突然下降,即可將反應室殘液吸至收集器。

  • 標準樣品的測定

在蒸餾樣品及空白前,為了練習蒸餾和滴定操作,可用標準硫酸銨試做實驗2 ~ 3次。

標準硫酸銨的含氮量是0.3mg/mL,每次實驗取2.0mL。

四、計算

樣品的含氮量(mg/mL)=

 

若測定的蛋白質含氮部分只是蛋白質(如血清),則:

 

樣品中蛋白質含量(mg/mL)=

 

式中:A為滴定空白用去的NaOH平均mL數(shù),B為滴定樣品用去的NaOH平均mL數(shù),V為樣品的mL數(shù),0.01 NaOH的摩爾濃度,14為氮的原子量,6.25為系數(shù)(蛋白質的平均含氮量為16%,由凱氏定氮法測出含氮量,再乘以系數(shù)6.25即為蛋白質量),N為樣品的稀釋倍數(shù)。

注意事項

(1)必須仔細檢查凱氏定氮儀的各個連接處,保證不漏氣。

(2)凱氏定氮儀必須事先反復清洗,保證潔凈。

(3)小心加樣,切勿使樣品沾污口部、頸部。

(4)消化時,須斜放凱氏燒瓶(45o左右)?;鹆ο刃『蟠?,避免黑色消化物濺到瓶口、瓶頸壁上。

(5)蒸餾時,小心加入消化液。加樣時將火力擰小或撤去。蒸餾時,切記火力不穩(wěn),否則將發(fā)生倒吸現(xiàn)象。

(6)蒸餾后應及時清洗定氮儀。

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