腺病毒(Adenovirus)是直徑約80-120 nm的無包膜的線性雙鏈DNA病毒,可迅速感染分裂和非分裂期細(xì)胞,與細(xì)胞表面受體結(jié)合后通過內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞,在細(xì)胞核孔附近聚集,并在感染后2h將腺病毒的DNA釋放到細(xì)胞核中并開始蛋白表達(dá)。通過對野生腺病毒進(jìn)行改造,保留包裝信號序列,去除病毒蛋白的編碼序列,不僅增加外源基因的裝載容量,而且降低細(xì)胞毒性和機(jī)體免疫反應(yīng),從而獲得安全性更高的基因?qū)胂到y(tǒng)。
腺病毒包裝系統(tǒng)的特點(diǎn):不整合到宿主細(xì)胞基因組、無插入致突變性、可進(jìn)行有效擴(kuò)增、獲得高滴度高純度的腺病毒。
腺病毒的優(yōu)勢
1. 是研究原代非增殖細(xì)胞基因表達(dá)的系統(tǒng):腺病毒感染細(xì)胞后,1-2天即可表達(dá),是研究原代非增殖細(xì)胞基因表達(dá)的系統(tǒng)。
2. 滴度高:腺病毒系統(tǒng)在轉(zhuǎn)有E1基因的HEK293細(xì)胞中可進(jìn)行自我復(fù)制,可產(chǎn)生滴度為1010~1011PFU/mL的病毒。
3. 載體容量大:可容納不超過5kb的片段。
4. 不整合到染色體中,無插入致突變性:腺病毒除卵細(xì)胞以外,幾乎在所有已知細(xì)胞中都不整合到染色體中,因此避免了因整合而引發(fā)的潛在的基因突變和隨機(jī)效應(yīng)。