1.Fluo/Am儲存液配制:將Fluo/Am溶于DMSO,配成終濃度為2mmol/L的儲存液,分裝,-70度凍存。
2.懸浮細胞染色:收集細胞并調(diào)整細胞濃度至2*10^6個/ml,加Fluo/Am至終濃度為5-10umol/L,置于,5%CO2。37度避光,孵育30-60min,其間輕輕振蕩幾次,并設置陰性對照(不加Fluo/Am)。
3.貼壁細胞染色:以5*10^5個細胞種植于24孔培養(yǎng)板中,置于5%CO2。37度培養(yǎng)一段時間,加入Fluo/Am至終濃度為5-10umol/L,置于5%CO2。37度避光,孵育30-60min。其間輕輕振蕩幾次,并設置陰性對照。
4.取出細胞或消化細胞,離心1500r/min 10min,去除多余染料,再用無鈣緩沖液沖洗PBS反復離心洗滌2次,最后用無鈣PBS重懸至0.5ml。