Bradford Protein Quantification Kit
Bradford蛋白濃度測定試劑盒
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規(guī)格 | 價格（元） |
Bradford蛋白濃度測定試劑盒 | MP1903-500T | 500T | 135 |
Bradford蛋白濃度測定試劑盒 | MP1903-1000T | 1000T | 190 |
Bradford蛋白濃度測定試劑盒 | MP1903-2500T | 2500T | 410 |
產品描述
目前，最cang用的蛋白濃度檢測方法是：BCA蛋白定量試劑盒（BCA Protein Assay Kit）和Bradford蛋白定量試劑盒（Bradford Protein Assay Kit）。與蛋白濃度測定的其他方法（比如：BCA法和Lowry法）相比，Bradford法更簡單、更穩(wěn)定、兼容性更好。Bradford法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學物質的影響，尤其是還原劑的影響。樣品中β-巰基乙醇的濃度可高達1M，DTT的濃度可高達5mM，但本法受高濃度去垢劑的影響明顯，需確保SDS低于0.01%，Triton X-100低于0.05%，Tween 20、60、80低于0.015%。含高濃度去污劑的蛋白定量，建議采用BCA蛋白定量試劑盒（MP1902-500T）。
本Bradford蛋白定量試劑盒（Bradford Protein Assay Kit）的檢測原理是：在酸性乙醇溶液中，考馬斯亮藍G250（Coommassie Brilliant Blue G250）與蛋白結合顏色由棕色變?yōu)樗{色，溶液的吸收峰從465nm遷移到595nm，顏色的變化與蛋白濃度成正比，因此，可通過檢測595nm處的吸光度對溶液中蛋白濃度進行測定。本試劑盒檢測速度很快，少量樣品一般只需10min即可完成檢測，檢測濃度下限達到25μg/ml，最小檢測蛋白量達到0.5μg，待測樣品體積為1～20μl，在50~1000 μg/ml濃度范圍內有較好的線性關系。
產品組分
組分編號 | 組分名稱 | 產品貨號（規(guī)格） | 儲存方法 | ||
MP1903-500T | MP1903-1000T | MP1903-2500T | |||
MP1903-A | G250染色液 | 100ml | 200ml | 500ml | 室溫 |
MP1903-B | 蛋白標準BSA | 20mg | 20mg | 20mg | 室溫 |
MP1903-C | 蛋白標準配制液 | 5ml | 10ml | 10ml | 室溫 |
保存與運輸方法
保存：室溫保存，1年有效。蛋白標準配制成溶液后應置于-20℃保存。
運輸：室溫運輸。
自備材料
1. 酶標儀或分光光度計、96孔板或比色杯、離心機、離心管
2. 蒸餾水、0.9% NaCl或PBS
使用方法
1. 蛋白標準品的準備
1.1 取1ml蛋白標準配制液加入到20mg蛋白標準BSA中，充分溶解后配制成20mg/ml的蛋白標準溶液，配制后可立即使用，溶解后的蛋白標準溶液應-20℃長期保存。
1.2 取適量20mg/ml蛋白標準，稀釋至終濃度為0.5mg/ml或所需濃度。例如取25μl 20mg/ml蛋白標準，加入975μl稀釋液，充分混勻，即可配制成0.5mg/ml蛋白標準?！咎貏e提示】：待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標準也宜溶解于什么樣的稀釋液中。但為了簡便起見，一般也可以用0.9%NaCl或PBS稀釋標準品。稀釋后的0.5mg/ml蛋白標準可以-20℃長期保存。
2. 蛋白濃度的測定
2.1 將標準品按0、1、2、4、8、12、16、20μl加到96孔板或EP管中，加標準品稀釋液補足至20μl，相當于標準品濃度分別為0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mg/ml。
2.2 加適當體積樣品到96孔板或EP管中。如果樣品不足20μl，加標準品稀釋液補足到20μl，需注意記錄樣品體積。
2.3 各孔加入200μlG250染色液，室溫放置3~5min。
2.4 酶標儀或分光光度計測定595nm波長處的吸光度（OD值），如無595nm，560～610nm波長范圍的吸光度也可。
2.5 根據BSA標準品的吸光度（減去標準品中空白孔的OD值即最終的讀數），繪制標準曲線。依據標準曲線和使用樣品體積計算樣品的蛋白濃度。
注意事項
1） G250染色液回復至室溫充分混勻后使用，有利于提高檢測的靈敏度，加完G250染色液后，盡量在30min內完成吸光度的測定，防止沉淀形成后影響實驗結果。
2） 蛋白標準在全部溶解后先混勻，再稀釋成一系列不同濃度的蛋白標準。
3） 待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標準也宜溶解于什么樣的稀釋液中，否則待測蛋白與蛋白標準所含非蛋白成分不一致，有可能導致測定不準確。
4） 建議每次測定都做標準曲線。因為測定時顏色會隨著時間的延長不斷加深，并且顯色反應的速度和溫度有關，所以除非精確控制顯色反應的時間和溫度，否則如需精確測定宜每次都做標準曲線。
5） 如果沒有酶標儀，也可以使用普通的分光光度計測定，但應考慮根據比色杯的最小檢測體積。應按比例適當加大G250染色液、樣品和標準品的用量使總體積不小于最小檢測體積，使用分光光度計測定蛋白濃度時，每個試劑盒可以測定的樣品數量可能會顯著減少。
6） 用比色杯測定蛋白含量時，由于考馬斯亮藍易結合石英比色杯，應優(yōu)先選用一次性塑料比色杯，如用玻璃比色杯，比色完畢后應立即用乙醇清洗干凈。
7） 試劑開封后請盡快使用，以防影響后續(xù)實驗效果。
8） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質產品。
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