銀染實驗外包
一、定義與原理
?定義?:銀染是一種通過化學反應使銀離子在蛋白質(zhì)上沉積形成可見的銀顆粒,從而實現(xiàn)對蛋白質(zhì)進行染色的技術。
?原理?:在堿性條件下,甲醛等還原劑可以將蛋白帶上的xiaosuanyin(銀離子)還原成金屬銀,這些金屬銀顆粒沉積在蛋白質(zhì)上,形成可見的染色效果。
二、試劑與材料
銀染過程中常用的試劑包括:
乙醇
冰醋酸(純乙酸)
xiaosuanyin
jiaquanrongye
碳酸鈉
liudailiusuanna
乙酸鈉等
這些試劑在銀染的不同步驟中發(fā)揮著不同的作用,如固定、致敏、染色、顯色和終止等。
三、實驗步驟
銀染實驗外包實驗步驟通常包括以下幾個階段:
1. ?固定?:使用含有乙醇和冰醋酸的固定液處理凝膠,以穩(wěn)定蛋白質(zhì)并去除凝膠中的雜質(zhì)。
2. ?致敏?:通過加入乙酸鈉和liudailiusuanna等試劑,使凝膠表面變得更容易吸附銀離子。
3. ?洗滌?:使用純水洗滌凝膠,去除多余的試劑。
4. ?染色?:將凝膠浸泡在含有xiaosuanyin和甲醛的染色液中,使銀離子與蛋白質(zhì)結(jié)合。
5. ?顯色?:在堿性條件下,使用含有碳酸鈉和甲醛的顯色液使銀離子還原成金屬銀,形成可見的染色效果。
6. ?終止?:使用終止液(如EDTA或ganansuan)停止顯色反應,并固定染色結(jié)果。
銀染法實驗具體步驟如下:
1. 固定:將凝膠放入約100ml固定液中,室溫搖動20分鐘或40分鐘以上甚至過夜。
2. 洗滌:棄去固定液,加入100ml 30%乙醇或100ml 10%甲醇,室溫搖動10分鐘。
3. 增敏:加入100ml銀染增敏液(1X)或100ml銀溶液(1X),室溫搖動2分鐘。
4. 洗滌:棄去增敏液,加入200ml MilliQ級純水或雙蒸水,室溫搖動10分鐘。
5. 顯色:加入100ml銀溶液(1X)或顯色液,室溫搖動10分鐘。
6. 洗滌:棄去顯色液,加入200ml MilliQ級純水或雙蒸水,室溫搖動1-1.5分鐘。
7. 顯影:根據(jù)顯色結(jié)果,使用顯影液進行顯影,直至看到目的蛋白帶