Timm病理實驗是一種生物化學中常用的染色方法,它主要用于顯示組織細胞內重金屬的分布,特別是鋅離子的分布。這種方法在神經科學研究中尤為重要,因為它可以顯示苔蘚纖維末梢的分布情況,苔蘚纖維是腦內含鋅量高的區(qū)域。
以下是Timm染色的基本步驟:
1.標本制備?:這通常包括開胸經左心室連續(xù)灌流、斷頭取腦、組織固定、蔗糖磷酸緩沖液浸泡以及低溫防護等步驟。這些步驟的目的是為了獲得適合染色的腦組織切片。
2.切片?:通過中隔海馬進行恒溫冷凍冠狀切片,切片在磷酸緩沖液中連續(xù)收集,片厚通常為30至50微米。
3.染色?:將切片貼附于多聚賴氨酸處理過的載玻片上,晾干后進行Timm染色。染色過程需要在避光的條件下進行,通常使用Timm顯影劑在26℃的水浴箱或恒溫搖床中染色90至150分鐘。
4.沖洗與封片?:染色后,切片用蒸餾水沖洗幾遍,可以選擇進行尼氏染色復染,也可不復染。最后,晾干切片并用中性樹脂封膠片。
需要注意的是,Timm染色方法包括一些關鍵的試劑和步驟,這些都需要嚴格按照實驗指南或試劑盒說明書進行操作。此外,實驗過程中還需要注意一些細節(jié)問題,如保持切片的濕潤、避免氣泡產生等,以確保染色的質量和結果的準確性。
Timm病理實驗實驗流程:
1.切片貼附于多聚賴氨酸處理過的載玻片上,-20℃保存;
2.做的時候拿出來晾干 ,約10分鐘;
3.把Timm顯影劑倒入修復盒中,放在在26℃的水浴箱或恒溫搖床里染色90-150 min,染色在避光的條件下進行;
4.染色后,切片用蒸餾水沖洗幾遍,可以尼式染色復染,也可不復染;
5.晾干,中性樹脂封膠片。
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實驗周期:3-4周