產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷
商品屬性：
產(chǎn)品英文名稱：DiR (DiIC18(7))
產(chǎn)品中文名稱：DiR (DiIC18(7))
規(guī)格：5mg
貨號：EY-01X8572
用途：僅供科研研究實驗
特點&優(yōu)勢:
• λEX/λEm: 748/780 nm(MeOH)。
產(chǎn)品形式深藍綠色油狀固體
使用中注意事項• 可溶于DMSO、DMF和乙醇。
保存建議:-20℃，避光保存12個月。
運輸條件:藍冰運輸
背景
DIR是一個親脂性、近紅外熒光花青染料。這個染料常用于標記細胞質(zhì)膜。兩個18-碳鏈插入到細胞膜，從而特定的、穩(wěn)定的細胞染色，幾乎不會發(fā)生細胞間的染料轉(zhuǎn)移。可以用乙醇配置其儲存液。細胞染色通常使用的濃度時1-10uM，孵育10-20分鐘的。
本產(chǎn)品具有下列特點:
1.操作簡便、快捷?？芍苯蛹尤氲綑z測平板。在96-孔板中檢測時,無需洗滌或收獲細胞,免去溶解步驟。
2. 無放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。
3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機溶劑來溶解甲臜產(chǎn)物。
4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進一步生成。
公司正在出售的產(chǎn)品：
AHA3 peptide 植物蛋白AHA3抗原(擬南芥 0.5mgAHA3 peptide 植物蛋白AHA3抗原(擬南芥)
CD59 Protein Human 重組人 CD59 蛋白
ACE2重組小鼠 ACE2 / Angiotensin-Converting Enzyme 2 蛋白 Protein
CD34 Protein Rat 重組大鼠 CD34 蛋白 (Fc 標簽)
MAX重組人 MAX / MYC associated factor X 蛋白 (His & GST 標簽) Protein
小鼠血管緊張素Ⅰ(Ang-Ⅰ)ELISA 試劑盒 96T/48T
Rat stem cell factor / mast cell growth factor (SCF/MGF) ELISA Kit 大鼠干細胞因子/肥大細胞生長因子(SCF/MGF)檢測試劑盒
Humanheparansulfate,HSELISAKit 人硫酸類肝素(HS)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝
Cheraxquadricarinatuslipovitellin/vitellin,Lv/Vn檢測試劑盒紅螯光殼螯蝦卵黃脂0蛋白/卵黃0蛋白(Lv/Vn)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T
原生質(zhì)酵母細胞轉(zhuǎn)化試劑盒20次
MouseIgMELISAKit小鼠IgM檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T
小鼠血小板反應蛋白/敏感蛋白1(TSP-1)ELISAKit ELISA. 96T/48T
小鼠骨粘連蛋白(ON)ELISAKit ELISA. 96T/48T
小鼠(FA)ELISAKit ELISA. 96T/48T
小鼠組蛋白H2b(histon-H2b)ELISAKit ELISA. 96T/48T
大鼠腺苷A1受體(ADORA1)檢測試劑盒 ，英文名： ADORA1 ELISA Kit
Pla vitamin C (VC) ELISA Kit 植物C(VC)檢測試劑盒
Mousebrainnaiureticpeptide,BNPELISAKit 小鼠腦素/腦尿肽(BNP)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforHumanamyloidbetapeptide1-40,ABeta1-40ELISAKit人β淀粉樣蛋白1-40
細胞HCK激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次
ELISAKitE大鼠雌激素
DiR (DiIC18(7))ACE2重組小鼠 ACE2 / Angiotensin-Converting Enzyme 2 蛋白 Protein
AHA3 peptide 植物蛋白AHA3抗原(擬南芥 0.5mgAHA3 peptide 植物蛋白AHA3抗原(擬南芥)
MAX重組人 MAX / MYC associated factor X 蛋白 (His & GST 標簽) Protein
CD59 Protein Human 重組人 CD59 蛋白
CD34 Protein Rat 重組大鼠 CD34 蛋白 (Fc 標簽)
操作步驟：
(一)獲得目的基因
1、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設(shè)計一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。
2、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA第一鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。
(二)構(gòu)建重組表達載體
1、載體酶切:將表達質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點)進行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。
2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。
(三) 獲得含重組表達質(zhì)粒的表達菌種
1、 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標志(抗Amp或藍白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。
2、 測序驗證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進入下步操作。否則應篩選更多克隆,重復亞克隆或亞克隆至不同酶切位點。
3、 以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達宿主菌的感受態(tài)細胞。
(四)誘導表達
1、挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養(yǎng)。
2、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。
3、取部分液體作為未誘導的對照組,余下的加入IPTG誘導劑至終濃度0.4mM作為實驗組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。
4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。
5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。
