一、方法原理簡(jiǎn)介

標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)：國(guó)家《中華人民共和國(guó)生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（GB 5749-2006）中增加了賈第鞭毛蟲(chóng)和隱孢子蟲(chóng)的微生物指標(biāo)，要求為<1個(gè)/10L。美國(guó)UniBest優(yōu)佰達(dá) 兩蟲(chóng)檢測(cè)系統(tǒng)運(yùn)用的檢測(cè)方法是國(guó)標(biāo)規(guī)定的“兩蟲(chóng)”IFA 檢測(cè)方法，采樣淘洗及 IMS 系統(tǒng)均符合國(guó)標(biāo)及美國(guó) EPA1623 的標(biāo)準(zhǔn)方法。

具體步驟如下：過(guò)濾采樣→淘洗濃縮→ IMS 磁分離→ IFA 染色→顯微鏡檢

二、主要特點(diǎn)及技術(shù)性能說(shuō)明

（一）、兩蟲(chóng)系統(tǒng)設(shè)計(jì)的標(biāo)準(zhǔn)性、合理性、適用性

1、 美國(guó)UniBest公司全自動(dòng)型兩蟲(chóng)檢測(cè)儀 IFA 染色系統(tǒng)符合并優(yōu)于中國(guó)國(guó)標(biāo)。

2、  美國(guó)UniBest公司全自動(dòng) 型兩蟲(chóng)檢測(cè)儀 IMS 免疫磁分離系統(tǒng)采用國(guó)標(biāo) GB/T 5749.12-2023 方法。

3、 美國(guó)UniBest公司全自動(dòng)型兩蟲(chóng)檢測(cè)儀過(guò)濾系統(tǒng)采用符合技術(shù)規(guī)范規(guī)定的一次性濾囊。

（二）、兩蟲(chóng)系統(tǒng)的可靠性、穩(wěn)定性

1、 過(guò)濾步驟回收率 ≥1

2、 淘洗步驟回收率 ≥80%

3、 IMS 免疫磁分離步驟回收率 ≥90%

4、 總回收率（過(guò)濾、淘洗、磁珠分離、染色）≥ 35%

5、 檢測(cè)結(jié)果相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差 ≤10%

6、 鏡檢率：賈第鞭毛蟲(chóng)孢囊 全部檢出，隱孢子蟲(chóng)卵囊 全部檢出

7、 檢測(cè)可處理高濁度水樣：可達(dá) 100（NTU）

8、 試劑盒配備預(yù)制的陽(yáng)性對(duì)照玻片，確保試劑盒的有效活性；*避免誤檢，確保檢測(cè)的準(zhǔn)確性和性。

9、 保質(zhì)期長(zhǎng)：美國(guó) UniBest 優(yōu)佰達(dá)公司 ClearScan 系列兩蟲(chóng) IFA 染色試劑保質(zhì)期長(zhǎng)達(dá) 24 個(gè)月，是業(yè)內(nèi)保質(zhì)期長(zhǎng)、性能穩(wěn)定的 IFA 試劑。

（三）、兩蟲(chóng)系統(tǒng)的*性、準(zhǔn)確性、經(jīng)濟(jì)性

1、 標(biāo)記單克隆抗體：包括抗隱孢子蟲(chóng)抗體和抗賈第鞭毛蟲(chóng)單克隆抗體的異硫氰酸熒光素（FITC），系一種免疫球蛋白M五聚體，由5 個(gè)FITC結(jié)合點(diǎn)位同時(shí)標(biāo)記一個(gè)抗體，具有顯著的明亮熒光效果，該抗體是國(guó)標(biāo)*的染色試劑。

2、 提供固色液：固色液使顯色更穩(wěn)定，幾天后仍不褪色鏡檢效果依然清晰。

3、 美國(guó) UniBest 優(yōu)佰達(dá)公司 ClearScan 系列 IFA 染色試劑已添加復(fù)染液，可使聚焦更準(zhǔn)確，計(jì)數(shù)更清晰準(zhǔn)確。

4、 提供陽(yáng)性對(duì)照玻片：試劑盒（25 次測(cè)試量）中含一個(gè)預(yù)制的載玻片供隨時(shí)自檢，使測(cè)試更便捷更省時(shí)。

5、 采樣過(guò)濾系統(tǒng)采用美國(guó) EPA1623 標(biāo)準(zhǔn)*的一次性濾囊，*杜絕樣品交叉污染；可以在不更改所有實(shí)驗(yàn)儀器、試劑及器具的情況下*替代其它品牌的一次性或多次使用的過(guò)濾器具。

6、 美國(guó) UniBest 公司 ClearScan 系列兩蟲(chóng)檢測(cè)系統(tǒng)，日常檢測(cè)運(yùn)行成本與市場(chǎng)同類(lèi)產(chǎn)品相比具有明顯優(yōu)勢(shì)。

三、美國(guó)UniBest優(yōu)佰達(dá) 兩蟲(chóng)檢測(cè)系統(tǒng)系統(tǒng)概述

（一）、采樣淘洗濃縮系統(tǒng)

采用符合中國(guó)國(guó)標(biāo)及美國(guó) EPA 要求的囊式過(guò)濾器對(duì)水樣進(jìn)行過(guò)濾，將孢囊、卵囊及其他物質(zhì)收集在過(guò)濾器上，該過(guò)濾器可用于實(shí)驗(yàn)室及野外現(xiàn)場(chǎng)水樣過(guò)濾。濾囊利用兩蟲(chóng)淘洗緩沖液將攔截在濾囊上的兩蟲(chóng)振蕩洗脫下來(lái)，再進(jìn)行離心收集。              

（二）、免疫磁分離系統(tǒng)（IMS）

IMS 過(guò)程使用美國(guó) UniBest 優(yōu)佰達(dá)公司的 ClearScan 系列兩蟲(chóng)免疫磁分離試劑盒，利用帶有特異性抗體的磁珠與樣品中的賈第鞭毛蟲(chóng)和隱孢子蟲(chóng)特異性抗原相結(jié)合，在磁場(chǎng)中高效選擇性分離，該步驟可保證檢測(cè)的特異性。

（三）、IFA（間接免疫熒光）染色系統(tǒng)

使用美國(guó) UniBest 優(yōu)佰達(dá)公司的 Cellabs 型檢測(cè)賈第鞭毛蟲(chóng)和隱孢子蟲(chóng)診斷試劑盒（內(nèi)含免疫球蛋白 M 五聚體 FITC 單克隆抗體）對(duì)水樣中的兩蟲(chóng)（抗原）進(jìn)行熒光標(biāo)記，同時(shí)利用細(xì)胞核染色劑 DAPI（4，6-二脒基-2-苯基吲哚）與細(xì)胞核中的雙鏈 DNA 結(jié)合發(fā)出熒光，排除假陽(yáng)性反應(yīng)，從而提高鏡檢準(zhǔn)確性。

（四）、顯微鏡檢系統(tǒng)

使用兩蟲(chóng)高級(jí)熒光顯微鏡對(duì)著色樣本進(jìn)行檢測(cè)，觀察樣本，對(duì)符合孢囊和卵囊大小、外形、熒光特性的被觀察物依據(jù)國(guó)標(biāo) GB/T 5750.12-2006 中賈第鞭毛蟲(chóng)孢囊與隱孢子蟲(chóng)卵囊的特征（見(jiàn)尾頁(yè)）進(jìn)行定性、定量分析。

四、技術(shù)參數(shù)

五、備注

按照國(guó)標(biāo) GB 5749.12-2023《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法》規(guī)定，“兩蟲(chóng)”檢測(cè)系統(tǒng)大致分為以下五個(gè)步驟，分別是：過(guò)濾采樣→ 淘洗濃縮→ IMS 磁分離→ IFA 染色→ 顯微鏡檢，其中過(guò)濾采樣僅僅是“兩蟲(chóng)”檢測(cè)環(huán)節(jié)中的一個(gè)非核心步驟，實(shí)驗(yàn)方法中所提到的過(guò)濾器的型號(hào)并不能斷章取義地代表兩蟲(chóng)檢測(cè)的采樣方法實(shí)質(zhì)，更不能以偏概全地代表兩蟲(chóng)檢測(cè)全過(guò)程的檢測(cè)方法；過(guò)濾采樣器只是收集樣品的工具，而并非兩蟲(chóng)檢測(cè)的關(guān)鍵技術(shù)，并且隨著兩蟲(chóng)采樣技術(shù)的進(jìn)步，只要使用的兩蟲(chóng)采樣器達(dá)到樣本采集的目的即可；如果僅僅用一個(gè)過(guò)濾采樣器的型號(hào)來(lái)自稱(chēng)是國(guó)標(biāo)甚至標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)方法，就會(huì)混淆了兩蟲(chóng)檢測(cè)方法以及國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的本來(lái)實(shí)質(zhì)。

美國(guó) UniBest 優(yōu)佰達(dá)集團(tuán)的“兩蟲(chóng)”檢測(cè)系統(tǒng)，采用的是一次性濾囊的過(guò)濾采樣方法，且性能指標(biāo)不僅滿(mǎn)足而且優(yōu)于國(guó)標(biāo)（國(guó)標(biāo)要求濾囊的孔徑為 1μm，我們的孔徑為0.45μm，0.65μm,1.0μm可選，更小的孔徑，更, 能, 保證兩蟲(chóng)的 截留, ）。

“兩蟲(chóng)”檢測(cè)的核心步驟在于 IFA（間接免疫熒光）染色，美國(guó) UniBest 優(yōu)佰達(dá)集團(tuán)“兩蟲(chóng)”染色試劑是國(guó)標(biāo)核心步驟的染色試劑。