α-淀-粉酶(α-AL)測試盒_淀粉系列
測定方法:分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格:50管/24樣
注 意:正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義:
淀-粉酶負責(zé)水解淀粉,包括α-淀-粉酶和β-淀-粉酶。α-淀-粉酶(EC 3.2.1.1)可隨機地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷鍵,生成葡萄糖、麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原糖,同時使淀粉的粘度降低,因此又稱為液化酶。
測定原理:
還原糖還原3,5-二硝基水楊酸生成棕紅色物質(zhì)。β-淀-粉酶不耐熱,在70℃鈍化15min,從而測定α-淀-粉酶活性。
α-淀-粉酶(α-AL)測試盒_淀粉系列
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、玻璃比色皿、研缽和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一:25mL×1瓶,常溫保存,若有晶體析出,需90℃加熱溶解后再用;
試劑二:20mL×1瓶,4℃保存,若有沉淀析出,需70℃加熱溶解后再用。
粗酶液提?。?br/>
組織:稱取0.1~0.2g樣本(建議稱取約0.1g樣本),加1 mL蒸餾水勻漿;將勻漿倒入離心管中,在室溫下放置提取15min,每隔5min振蕩1次,使其充分提取;3000g,25℃離心10min,吸取上清液并且加蒸餾水定容至10 mL,搖勻,即為淀-粉酶原液。
血清(漿):直接檢測。
操作步驟和加樣表(在1.5mLEP管中依次加入下列試劑):
1、分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長到540 nm,蒸餾水調(diào)零。
2、試劑一或試劑二40℃預(yù)熱10min
3、測定步驟
試劑(μL)對照管測定管
α淀-粉酶原液250250
70℃水浴15min左右,冷卻
蒸餾水250
試劑二250
在40℃恒溫水浴中準(zhǔn)確保溫5min
試劑一500500
混勻,95℃水浴5min,冷卻, 540nm處讀取對照管和測定管吸光度,計算ΔA=A測定管-A對照管。