大腸桿菌O157：H7顯色培養(yǎng)基是用于食品、病人糞便樣品中O157：H7菌的快速檢測(cè)。O157：H7菌顯亮紅色、淡紅色或紅色，菌落周圍沒(méi)有藍(lán)色暈圈，大腸桿菌和大腸菌群顯暗藍(lán)色、藍(lán)色或紫色，菌落周圍有藍(lán)色暈圈；其它細(xì)菌顯藍(lán)色、黃色或無(wú)色。本培養(yǎng)基的特異性高，可以克服SMAC培養(yǎng)基引起的假陽(yáng)性和假陰性結(jié)果，是一種很理想的快速檢測(cè)培養(yǎng)基。
成份 (g/L)
特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) | 68.4 |
混合顯色劑 | 2.6 |
瓊脂 | 15.0 |
pH 7.0 ± 0.1 25 ℃ | |
CT 添加劑 1ml/ 支 *5
此配方可以進(jìn)行改良或增加營(yíng)養(yǎng)成份以獲得*的結(jié)果。
注意
此培養(yǎng)基僅供實(shí)驗(yàn)室使用。
用法
稱取本品 17.2g加入 200ml 蒸餾水，加熱煮沸溶解并不停攪拌，加熱2分鐘左右。冷卻至 45-50 ℃時(shí)，加入 CT 添加劑混勻，
傾入無(wú)菌平皿。
注意：制備好的培養(yǎng)基一定要保持表面干燥，可在 36±1℃的培養(yǎng)箱中倒置放置 1-2 小時(shí)。
貯存
制備好的平板可保存 2-5 天，應(yīng)避免光線直接照射。干燥培養(yǎng)基應(yīng)放置于陰暗干燥處， 保存溫度 2-8 ℃，注意避光保存。
失效
干燥培養(yǎng)基超過(guò)保質(zhì)期、結(jié)塊和顏色變化都不能使用。
操作步驟
1、按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、 SN 標(biāo)準(zhǔn)、 FDA 標(biāo)準(zhǔn)或其它方法制備樣品液；
2、取 25 克樣品液加入 225ml mEC 肉湯或 mTSB 肉湯中， 36±1℃ 增菌培養(yǎng) 18-24 小時(shí)；
3 、用 3mm 接種環(huán)取 1 環(huán)增菌液，劃線接種到 O157 菌顯色培養(yǎng)基上，做 2 個(gè)平板；
4 、 36±1 ℃培養(yǎng) 18-24h ， O157:H7 菌顯亮紅色，淡紅色或紅色 ，菌落周圍沒(méi)有藍(lán)色暈圈 大腸桿菌和大腸菌群顯暗藍(lán)色、藍(lán)色或紫色， 其它細(xì)菌顯藍(lán)色、黃色或無(wú)色；
5 、對(duì)典型菌落可做 O157:H7 菌血清學(xué)試驗(yàn)和全套生化試驗(yàn)。
注：必須在 36±1℃ 培養(yǎng) 24 小時(shí)內(nèi)判讀結(jié)果，以免菌落顏色發(fā)生變化。
質(zhì)量控制
1 、外觀
此干燥培養(yǎng)基的粉末均勻，具有良好的流動(dòng)性，呈淡藍(lán)色。制備好的平板呈藍(lán)色色固體培養(yǎng)基。
2 、微生物試驗(yàn)
在 36 ± 1 ℃培養(yǎng) 18-24h 小時(shí)：
質(zhì)控菌株 | ATCC | 生長(zhǎng)情況 | 菌落顏色 |
大腸桿菌 O157 | 35150 | +++ | 亮紅色 |
* | 25923 | -/+ | 黃色 或無(wú)色 |
大腸桿菌 | 25922 | +++ | 暗藍(lán)色，菌落周圍有暈圈 |
沙門氏菌 | 14028 | +++ | 藍(lán)色 |
奇異變形桿菌 | 12453 | +/－ | 無(wú)色 |
方法的局限性
本培養(yǎng)基對(duì)典型大腸桿 O157:H7 必須做血清學(xué)試驗(yàn)或生化試驗(yàn)。
典型特征
典型大腸桿菌O157:H7菌顯亮紅色、淡紅色或紅色，菌落周圍沒(méi)有藍(lán)色暈圈；大腸桿菌和大腸菌群顯藍(lán)色或紫色，菌落周圍有藍(lán)色暈圈；其它細(xì)菌顯藍(lán)色、黃色或無(wú)色；
