人脫氧吡啶酚/脫氧吡啶啉(DPD)檢測試劑盒價格雙抗體夾心法是檢測抗原zui常用的方法,操作步驟如下:
1) 將特異性抗體與固相載體聯(lián)結(jié),形成固相抗體。洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。
2) 加受檢標本,保溫反應(yīng)。標本中的抗原與固相抗體結(jié)合,形成固相抗原抗體復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)。
3) 加酶標抗體,保溫反應(yīng)。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢抗原的量相關(guān)。
4) 加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。通過比色,測知標本中抗原的量。在臨床檢驗中,此法適用于檢驗各種蛋白質(zhì)等大分子抗原,例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要獲得針對受檢抗原的異性抗體,就可用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物而建立此法。如抗體的來源為抗血清,包被和酶標用的抗體分別取自不同種屬的動物。如應(yīng)用單克隆抗體,一般選擇兩個針對抗原上不同決定簇的單抗,分別用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物。這種雙位點夾心法具有很高的特異性,而且可以將受檢標本和酶標抗體一起保溫反應(yīng),作一步檢測。
固相載體
固相載體在人脫氧吡啶酚/脫氧吡啶啉(DPD)檢測試劑盒價格測定過程中作為吸附劑和容器,不參與化學(xué)反應(yīng)??勺鱁LISA 中載體的材料很多,zui常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有較強的吸附蛋白質(zhì)的性能,抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后仍保留原來的免疫學(xué)活性,加之它的價格低廉,所以被普遍采用。
聚苯乙烯為塑料,可制成各種形式。ELISA 載體的形狀主要有三種:微量滴定板、小珠和小試管。以微量滴定板zui為常用,于EILSA的產(chǎn)品稱為ELISA板,上標準的微量滴定板為8×12 的96 孔式。為便于作少量標本的檢測,有制成8聯(lián)孔條或12聯(lián)孔條的,放入座架后,大小與標準ELISA 板相同。ELISA 板的特點是可以同時進行大量標本的檢測,并可在特制的比色計上迅速讀出結(jié)果。現(xiàn)在已有多種自動化儀器用于微量滴定板型的ELISA 檢測,包括加樣、洗滌、保溫、比色等步驟,對操作的標準化極為有利。聚苯乙烯經(jīng)射線照射后,其吸附性能特別是對免疫球蛋白的吸附性能增加,應(yīng)用于雙抗體夾心法可使固相上抗體量增多,但用于間接法測抗體時空白值較大。
良好的人脫氧吡啶酚/脫氧吡啶啉(DPD)檢測試劑盒價格板應(yīng)該是吸附性能好,空白值低,孔底透明度高,各板之間、同一板各孔之間、同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于原料的不同和制作工藝的差別,各種產(chǎn)品的質(zhì)量差異很大,因此,每一批號的ELISA板在使用前須事先檢查其性能。常用的檢查方法為:以一定濃度的人IgG(一般為10ng/ml)包被ELISA板各孔,洗滌后每孔內(nèi)加入適當稀釋度的酶標抗人IgG 抗體,保溫后洗滌,加底物顯色,終止酶反應(yīng)后,分別測每孔溶液的吸光度。控制反應(yīng)條件,使各孔讀數(shù)在吸光度0.8左右。計算全部讀數(shù)的平均值。所有單個讀數(shù)與全部讀數(shù)的均數(shù)之差,應(yīng)小于10%。
與聚苯乙烯類似的塑料是聚氯乙烯。作為ELISA 固相載體,聚氯乙烯的特點為質(zhì)軟板薄,可剪割,價廉,但光潔度不如聚苯乙烯板,孔底亦不如聚苯乙烯平整。聚氯乙烯對蛋白質(zhì)的吸附性能比聚苯乙烯高,但空白值也略高。為比較不同固相在某一ELISA測定中的優(yōu)劣,可應(yīng)用如下的試驗:用其他免疫學(xué)測定方法選出一個典型的陽性標本和陰性標本,將它們進行一系列稀釋后,在不同的固相載體上按預(yù)定的ELISA操作步驟進行測定,然后比較結(jié)果。在哪一種載體上陽性結(jié)果與陰性結(jié)果差別zui大,這種載體就是這一ELISA測定項目的zui合適的固相載體。
在人脫氧吡啶酚/脫氧吡啶啉(DPD)檢測試劑盒價格ELISA中,用作固相載體的小珠一般為直徑0.6cm的圓珠,表面經(jīng)磨砂處理后吸附面積大大增加。ELISA板孔的吸附面積約為200mm2,小珠均為1000mm2,將近ELISA板孔的5倍。吸附面積的增大即意味著固相抗原或抗體量的增加。再者,球型小珠的表面弧度更有利于吸附的抗原決定簇或抗體結(jié)合位點的暴露面處于*反應(yīng)狀態(tài),因此珠式人脫氧吡啶酚/脫氧吡啶啉(DPD)檢測試劑盒價格的反應(yīng)往往更為靈敏。小珠的另一特點是更易于使洗滌*,使用特殊的洗滌器,使小珠在洗滌過程中滾動淋洗,其洗滌效果遠較板孔的浸泡式為好。但由于磨砂工藝的難度較大,小珠的均一性較差。小試管作為固相載體也有較大的吸附表面,而且標本的反應(yīng)量也相應(yīng)增加。板式及珠式ELISA的標本量一般為100-200ul,而小試管可根據(jù)需要加大反應(yīng)體積,標本反應(yīng)量的增加有助于試驗敏感性的提高。小試管還可以當作比色杯,zui后直接放入分光光度計中比色。
也有應(yīng)用聚苯乙烯膠乳或其他材料制成的微粒作為ELISA固相載體的。其優(yōu)點是表面積極大,反應(yīng)在懸液中進行,其速率與液相反應(yīng)近似。以含鐵的磁性微粒作為ELISA固相載體,反應(yīng)后用磁鐵的吸引進行分離,洗滌方便,試劑盒一般均配以特殊儀器。
人脫氧吡啶酚/脫氧吡啶啉(DPD)檢測試劑盒價格相關(guān)產(chǎn)品如下:hz-3499E 豬超氧化物歧化酶(SOD)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3500E 豬血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3501E 豬黑色素瘤轉(zhuǎn)移表面黏附分子(MMSAM)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3502E 豬可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體2(VEGFR-2/sFLK-1)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3503E 豬血管內(nèi)皮鈣粘著蛋白復(fù)合體(VE-cad)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3504E 豬去甲腎上腺素(NE)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3505E 豬血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3506E 豬凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3507E 豬B細胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3508E 豬Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3509E 豬氫化可的松(HYD)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3510E 豬一氧化氮(NO)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3511E 豬內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eNOS)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3512E 豬內(nèi)皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3513E 豬血管生成素2(ANG-2)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3514E 豬血管生成素受體/含免疫球蛋白樣環(huán)和上皮生長因子樣域酪氨酸激酶2(Tie-2)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3515E 豬血管生成素1(ANG-1)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3516E 豬乙酰膽堿受體抗體(AChRab)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3517E 豬熱休克蛋白90(HSP-90)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3518E 豬熱休克蛋白70(HSP-70)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3519E 豬熱休克蛋白40(HSP-40)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3520E 豬熱休克蛋白20(HSP-20)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3521E 豬C反應(yīng)蛋白(CRP)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3522E 豬可溶性細胞間粘附分子1(sICAM-1)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3523E 豬主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類(MHCⅡ/SLAⅡ)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3524E 豬可溶性P選擇素(sP-Selectin)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3525E 豬白介素17(IL-17)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3526E 豬髓磷脂堿性蛋白(MBP)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3527E 豬生長激素釋放多肽(GHRP)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3528E 豬α干擾素(IFN-α)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3529E 豬磷酸化細胞外信號調(diào)節(jié)激酶(pERK)ELISA kit 血清/組織/尿液
hz-3530E 豬乙酰膽堿(ACh)ELISA kit 血清/組織/尿液