小鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRACP-5b）ELISA試劑盒

ELISA的操作要點

優(yōu)質(zhì)的試劑，良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條

件。ELISA的操作因固相載體的形成不同而有所差異，國內(nèi)醫(yī)學(xué)檢驗一般均用板式點。

嚴(yán)格遵照規(guī)定操作，必能得出準(zhǔn)確的結(jié)果

操作步驟：

固相包被→加待測樣品→溫育→洗滌+加酶標(biāo)物→溫育→洗滌→加底物→溫育一加終止液→比色→判定結(jié)果。ELISA操作較繁雜，操作不當(dāng)將引起較大的誤差。在操作中應(yīng)注意以下5個方面。

1．隨著病情的進(jìn)展或由其他因素影響，某些抗體在機體內(nèi)的含量發(fā)生大幅波動，因此有必要對標(biāo)本進(jìn)行預(yù)處理，例如對血清標(biāo)本作適當(dāng)稀釋，或離心分離血脂等。間接法測定中，標(biāo)本適當(dāng)稀釋還可降低非特異性反應(yīng)。

2．加樣一般使用加液器，在ELISA中一般有4次加樣：加標(biāo)本、加酶結(jié)合物、加底物和加終止液。加標(biāo)本時必須每份標(biāo)本使用一支移液器吸嘴，以免交叉污染。加酶結(jié)合物、底物和終止液時則不需更換吸嘴。

3．在成批手工檢測中，還應(yīng)注意操作時差的影響。加樣及混勻時間的差異，使抗原抗體反應(yīng)和酶促反應(yīng)時間不*，對競爭法及定量檢測影響很大，不注意可能會導(dǎo)致錯誤結(jié)果或定量不準(zhǔn)。

4．洗滌是ELISA操作過程中決定實驗成敗的一個關(guān)鍵步驟。目的是除去未結(jié)合的免疫反應(yīng)物，終止抗原抗體反應(yīng)，除去標(biāo)本中與反應(yīng)無關(guān)的成分、游離的酶標(biāo)物以及反應(yīng)過程中吸附于固相載體上的非特異性物質(zhì)?？捎孟窗鍣C洗板或手工洗板，前者洗滌質(zhì)量較好，各反應(yīng)孔洗滌效果均一，批內(nèi)、批間差異小，手工洗板應(yīng)注意控制各孔洗滌效果，差異不宜太大。

5．準(zhǔn)確判定結(jié)果須使用ELISA測讀儀（酶標(biāo)儀），比色法判讀可選擇單波長或雙波長，根據(jù)反應(yīng)液顏色的不同選用不同波長的濾光片，以空白孔校零測定反應(yīng)孔的吸光度值（A值）。酶標(biāo)儀具有良好的重復(fù)性。。