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人延伸蛋白A(EloA)ELISA試劑盒

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更新時(shí)間:2016-09-17 20:54:12瀏覽次數(shù):304次

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人延伸蛋白A(EloA)ELISA試劑盒
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人延伸蛋白A(EloA)ELISA試劑盒?

 

實(shí)驗(yàn)開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫;試劑或樣品配制時(shí),均需充分混勻,并盡量避免起泡。

1.加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。給酶標(biāo)板覆膜,37孵育2小時(shí)。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.棄去液體,甩干,每個(gè)孔中加入Detection Ab工作液 100μl(在使用前15分鐘內(nèi)配制,酶標(biāo)板加上覆膜,37溫育1小時(shí)。

3.棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板 3次,每次浸泡1-2分鐘,大約350μl /每孔,甩干并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干。

4.每孔加HRP Conjugate工作液臨用前15分鐘內(nèi)配制)100μl,加上覆膜,37溫育1小時(shí)。

5.棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,方法同步驟3。

6.每孔加底物溶液100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37避光孵育15分鐘左右根據(jù)實(shí)際顯色情況酌情縮短或延長,但不可超過30分鐘。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度時(shí),即可終止。

7.每孔加終止液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。

8.立即用酶標(biāo)儀在450nm波長測量各孔的光密度(OD。應(yīng)提前打開酶標(biāo)儀電源,預(yù)熱儀器,設(shè)置好檢測程序。

9.實(shí)驗(yàn)完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結(jié)束。

洗滌方法:

1. 自動(dòng)洗板機(jī):每孔加入洗滌液350μl,注入與吸出間隔60秒。洗板5次。

2. 手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,在潔凈的吸水紙上拍干,每孔加洗滌液350μl,浸泡1-2分鐘,吸去不可觸及板壁或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體,在厚的吸水紙上拍干。洗板5次。

 

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ELISA法是免疫診斷中的一項(xiàng)新技術(shù),現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定,根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果,認(rèn)為ELISA法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩(wěn)定及易于自動(dòng)化操作等特點(diǎn)。不僅適用于臨床標(biāo)本的檢查,而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚*千份標(biāo)本,因此,也適合于血清流行病學(xué)調(diào)查。本法不僅可以用來測定抗體,而且也可用于測定體液中的循環(huán)抗原,所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域的應(yīng)用范圍日益擴(kuò)大,

可概括四個(gè)方面:

1、免疫酶染色各種細(xì)胞內(nèi)成份的定位。

2、研究抗酶抗體的合成。

3、顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應(yīng)。

4、定量檢測體液中抗原或抗體成份。

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