人促生長激素釋放激素(GHRH)ELISA試劑盒
◎選擇正規(guī)廠家,產(chǎn)品經(jīng)相應政府部門審核認可,試劑應從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡便性、安全性及經(jīng)濟性全面評價。
◎靈敏度:有二層含義,1)為試劑檢出被檢物質(zhì)的zui低量的能力;2)為試劑對大量樣品中陽性檢出的能力。
◎特異性:常用交叉反應率表示。含有與待測物相近結構部份的物質(zhì)可能存在交叉反應,使測定結果升高,可能導致假陽性,所以交叉反應是評價其質(zhì)量的關鍵指標。
◎精密度:ELISA試劑一般指其批內(nèi)CV%,其值應小于15%;定量試劑應同時考察線性范圍。
◎準確度:通過添加回收實驗進行評價。
◎簡便性:指在不影響試劑的前三項指標的前題下,實驗和測定步驟越少越好,在定性實驗中結果判斷簡單明了,定量試驗結果計算也應簡單。
◎安全性:指試劑對操作者和環(huán)境安全無害無傳染性。
◎經(jīng)濟性:試劑在同等質(zhì)量條件下通過大規(guī)模生產(chǎn)或技術進步降低成本,而市場價格比較合理。
◎試劑評價:需要有的確證方法和確證的樣品進行檢測。
操作程序總結
準備試劑,樣品和標準品
加入準備好的樣品和標準品,37℃反應30分鐘
洗板5次,加入酶標試劑,37℃反應30分鐘
洗板5次,加入顯色液A、B,37℃顯色10分鐘
加入終止夜
15分鐘內(nèi)讀OD值
人促生長激素釋放激素(GHRH)ELISA試劑盒性能
1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性:不與其它細胞因子反應。
3. 重復性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
結 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的AC-1標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的AC-1含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。
注意事項
1. 當混合蛋白溶液時應盡量輕緩,避免起泡。
2. 洗滌過程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。
3. 一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,*使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。
5. 如標本中待測物質(zhì)含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)。
6. 在配制標準品、檢測溶液工作液時,請以相應的稀釋液配制,不能混淆。
7. 底物請避光保存。
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