Fluo-3 AM是zui常用的檢測細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的熒光探針之一。分子式為C51H50Cl2N2O23，分子量為1129.85。
    Fluo-3和Fura-2相比，其優(yōu)點(diǎn)是：一方面可以被氬離子激光（argon-ion laser）的488nm激發(fā)光激
發(fā)，便于檢測；另一方面，F(xiàn)luo-3和鈣離子結(jié)合后熒光變化更強(qiáng)，即對鈣離子濃度變化的檢測更加靈敏；同時，F(xiàn)luo-3和鈣離子的結(jié)合能力較弱，這樣可以比Fura-2檢測到細(xì)胞內(nèi)更高濃度的鈣離子水平；此外，對于細(xì)胞內(nèi)的鈣離子的即時變化反應(yīng)得更加準(zhǔn)確，減小了因?yàn)楹外}離子解離速度慢而導(dǎo)致的熒光變化滯后。
    本Fluo-3 AM （鈣離子熒光探針） 是配制于無水DMSO （anhydrous DMSO）中的儲存液，濃度為5mM。
    Fluo-3 AM是一種可以穿透細(xì)胞膜的熒光染料。Fluo-3 AM的熒光非常弱，其熒光不會隨鈣離子濃度
升高而增強(qiáng)。Fluo-3 AM進(jìn)入細(xì)胞后可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成Fluo-3，從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)。Fluo-3可以和鈣離子結(jié)合，結(jié)合鈣離子后可以產(chǎn)生較強(qiáng)的熒光，zui大激發(fā)波長為506nm，zui大發(fā)射波長為526nm。實(shí)際檢測時*使用的激發(fā)波長為488nm左右，發(fā)射波長為525-530nm。Fluo-3的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜參考下圖。
                    
    用于細(xì)胞內(nèi)鈣離子檢測時，F(xiàn)luo-3 AM的常用濃度為0.5-5μM。通常用含有0.5-5μM的Fluo-3 AM適
當(dāng)溶液和細(xì)胞一起在20-37℃孵育15-60分鐘進(jìn)行熒光探針裝載，隨后適當(dāng)洗滌，洗滌后可以考慮適當(dāng)再孵育20-30分鐘以確保Fluo-3 AM在細(xì)胞內(nèi)*轉(zhuǎn)變成Fluo-3。