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大鼠可溶性血管細(xì)胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA試劑盒

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更新時(shí)間:2016-04-28 05:41:19瀏覽次數(shù):419次

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“大鼠可溶性血管細(xì)胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA試劑盒"標(biāo)本要求 :
標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

大鼠可溶性血管細(xì)胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA試劑盒 組成:

試劑盒組成 48孔配置 96孔配置 保存
說明書 1 1  
封板膜 2片(48 2片(96  
密封袋 1個(gè) 1個(gè)  
酶標(biāo)包被板 1×48 1×96 2-8℃保存
標(biāo)準(zhǔn)品 0.5ml×1 0.5ml×1 2-8℃保存
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 1.5ml×1 2-8℃保存
酶標(biāo)試劑 3 ml×1 6 ml×1 2-8℃保存
樣品稀釋液 3 ml×1 6 ml×1 2-8℃保存
顯色劑A 3 ml×1 6 ml×1 2-8℃保存
顯色劑B 3 ml×1 6 ml×1 2-8℃保存
終止液 3ml×1 6ml×1 2-8℃保存
20倍濃縮洗滌液 20ml×1 30ml×1 2-8℃保存
大鼠可溶性血管細(xì)胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA試劑盒中,進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的,其中包括:
(1)固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
(2)包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí),要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,在其它試驗(yàn)條件相同時(shí),觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值z(mì)ui大而蛋白量zui少的濃度。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml。
(3)酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定(見酶標(biāo)記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對(duì)供氫體的選擇要求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時(shí)間后,應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是雙氧水在臨用前加入。

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