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閱讀:363發(fā)布時(shí)間:2013-4-7
賽默飛世爾科技推出的Thermo Scientific KingFisher 磁珠純化技術(shù)是新一代樣品純化技術(shù),在 KingFisher系統(tǒng)上利用轉(zhuǎn)移磁珠的純化方法,從普通樣品如:血液、動(dòng)植物組織、細(xì)菌、細(xì)胞、病毒;以及疑難樣品如:唾液、土壤、糞便、FFPE、法檢等樣品中,自動(dòng)化快速提取高產(chǎn)量、高質(zhì)量、高完整度的DNA、RNA樣品。KingFisher 磁珠純化技術(shù)及KingFisher自動(dòng)磁珠純化儀,除了在核酸純化領(lǐng)域有的表現(xiàn)外,作為開放的平臺(tái),根據(jù)試劑盒種類不同,KingFisher 也出色應(yīng)用于蛋白質(zhì)純化、免疫細(xì)胞分選、細(xì)菌富集等領(lǐng)域。
隨著分子生物技術(shù)的發(fā)展,科研及臨床檢測(cè)要求的提高,核酸純化方法也經(jīng)歷了密度梯度離心,酚氯仿、*、異戊醇抽提,二氧化硅吸附等化學(xué)物理方法。目前,基于硅膠膜對(duì)核酸特異結(jié)合的原理所開發(fā)的方法已成為核酸純化的主流方法。為了減少化學(xué)、物理因素對(duì)核酸的破壞和降解,科學(xué)家們力求開發(fā)快速、溫和的純化方法,在確保遺傳信息的完整性同時(shí),提高工作效率。而KingFisher磁珠純化法不僅滿足了科研工作者對(duì)核酸質(zhì)量的高要求,同時(shí)其自動(dòng)化、通量高、速度快、靈敏度高的特性也提高了科研工作者的工作效率。目前轉(zhuǎn)移磁珠的磁珠純化方案正在逐步替代以往的各種方法,特別是目前普遍應(yīng)用的離心柱法。
酚法抽提、玻璃珠沉淀法、離心柱法與磁珠法:
經(jīng)典的核酸純化法采用酚、氯仿抽提,樣品經(jīng)過處理后分為水相和有機(jī)相,通過酒精離心沉淀水相中核酸的方法純化樣品中的核酸,這就是我們所說的酚-率氯仿抽提法。酚法抽提相對(duì)穩(wěn)定,至今仍被多數(shù)科技工作者廣泛應(yīng)用,也是其他多種提取方法的操作基礎(chǔ)。
隨后,科學(xué)家發(fā)現(xiàn)核酸與硅存在特異結(jié)合,并開發(fā)了用玻璃珠吸附核酸,離心沉淀后經(jīng)過洗和洗脫得到純化的核酸樣品,因玻璃珠比重較大,容易離心到管底,從而縮短了離心時(shí)間,目前此方法仍被部分實(shí)驗(yàn)室采用。
后來科學(xué)家將玻璃珠改成玻璃纖維,并將玻璃纖維制成薄膜狀,置于離心管中層,用離心的方法從裂解液中吸附,這就是目前核酸純化的主流方法--離心柱法。離心柱法極大簡(jiǎn)化了操作流程、縮短操作時(shí)間,目前已成為大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室主流純化方法;但離心柱法樣品與硅介質(zhì)結(jié)合時(shí)間短,樣品回收率低,并對(duì)樣品有一定的損傷。 以上提到的三種方法都是需要離心操作的純化方法(圖1),每一批樣品的提取都涉及到開關(guān)離心管蓋、廢液處理、加液的操作,不僅引入了人為誤差,也容易在大批量樣品處理時(shí)造成交叉污染。而應(yīng)用磁珠純化技術(shù),則可以利用磁鐵特異吸附磁珠(圖2A),從而省去離心操作,減少人為操作環(huán)節(jié),避免人為誤差,不僅節(jié)省時(shí)間,同時(shí)使高通量純化成為可能。
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