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技術(shù)文章

無(wú)需純化DNA的植物組織直接PCR

閱讀：397發(fā)布時(shí)間：2013-4-27

DNA提取是許多分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的*步，譬如PCR、克隆和測(cè)序。核酸純化的原始目的是為了去除可能干擾后繼反應(yīng)的雜質(zhì)，對(duì)于PCR技術(shù)來(lái)說(shuō)，若是能跳過(guò)這一步，直接利用樣本進(jìn)行PCR，那不僅能省錢(qián)省力，還能避免交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)。由于現(xiàn)在的DNA聚合酶性能已經(jīng)越來(lái)越強(qiáng)大，實(shí)驗(yàn)室之間早已流傳著各種直接用樣品進(jìn)行PCR的小技巧，不過(guò)大多只限于哺乳動(dòng)物細(xì)胞或者細(xì)菌類(lèi)，而甚少涉及植物細(xì)胞。
愿望是美好的，現(xiàn)實(shí)是殘酷的。植物組織富含多糖、多酚和蛋白等物質(zhì)，很有可能抑制PCR反應(yīng)，怎么辦？賽默飛世爾派出了Phire熱啟動(dòng) II DNA聚合酶，來(lái)對(duì)付這些潛在的拖后腿的PCR抑制劑。
Phire熱啟動(dòng) II DNA聚合酶是一種特殊的工程酶，融合有DNA 雙鏈結(jié)合蛋白，不但聚合能力強(qiáng)，而且對(duì)多種植物組織中的PCR 抑制劑表現(xiàn)出*的抵抗力。有了這員猛將，Phire 植物組織直接PCR試劑盒即可直接從植物樣本中擴(kuò)增DNA，而無(wú)需預(yù)*行費(fèi)時(shí)而昂貴的DNA純化。
此酶是一種特殊的工程酶，融合有DNA 雙鏈結(jié)合蛋白，不但聚合能力強(qiáng)，而且對(duì)多種植物組織中的PCR 抑制劑表現(xiàn)出*的抵抗力。有了這員猛將，Phire 植物組織直接PCR試劑盒即可直接從植物樣本中擴(kuò)增DNA，而無(wú)需預(yù)*行費(fèi)時(shí)而昂貴的DNA純化。
無(wú)論是新鮮植物還是4ºC貯存或者凍存的植物都可作為模板材料。此外，貯存在諸如Whatman 903® 和FTA® 卡片上的植物材料也可作為模板材料。賽默飛世爾的研究人員還曾用儲(chǔ)存于-20ºC 達(dá)十年之久的橡樹(shù)葉片成功進(jìn)行了直接PCR。
除了DNA聚合酶，Phire植物組織直接PCR試劑盒還包含一整套的優(yōu)化試劑，制樣工具以及對(duì)照引物，可以方便地取樣和擴(kuò)增。使用Harris Uni-Core取樣器和切片墊取樣，可以輕松獲得大小均一的樣本。取樣后，按壓活塞將已取到的樣本小塊直接放入PCR反應(yīng)液中，開(kāi)展PCR擴(kuò)增。


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