問題1：培養(yǎng)液pH 值變化太快

　　可能原因

　?。?）CO2 張力不對

　?。?）培養(yǎng)瓶蓋擰得太緊

　?。?）NaHCO3 緩沖系統(tǒng)緩沖力不足

　?。?）培養(yǎng)液中鹽濃度不正確

　?。?）細菌、酵母或真菌污染

　　建議解決方法

　?。?）按培養(yǎng)液中NaHCO3 濃度增加或減少培養(yǎng)箱內(nèi)CO2 濃度，2.0g/L 到3.7g/L 濃度NaHCO3 對應(yīng)CO2 濃度為5% 到10%。

　　（2）松開瓶蓋1/4 圈。

　?。?）改用不依賴CO2 培養(yǎng)液。加HEPES 緩沖液至10 到25mM 終濃度。

　?。?）在CO2 培養(yǎng)環(huán)境中改用基于Earle′s 鹽配制的培養(yǎng)液，在大氣培養(yǎng)環(huán)境中培養(yǎng)改用Hanks 鹽配制的培養(yǎng)液。

　　（5）丟棄培養(yǎng)物，或用抗生素除菌。

　　問題2：培養(yǎng)液出現(xiàn)沉淀，但pH值不變

　　可能原因

　　（1）洗滌劑清洗后殘留有磷酸鹽，將培養(yǎng)基成分沉淀下來

　　（2）冰凍保存培養(yǎng)液

　　建議解決方法

　　（1）用去離子水反復(fù)沖洗玻璃器皿，然后滅菌。

　　（2）將培養(yǎng)液加熱到37℃，搖動使其溶解如沉淀仍然存在，丟棄培養(yǎng)液。

　　問題3：培養(yǎng)液出現(xiàn)沉淀， 同時pH 發(fā)生變化

　　可能原因

　　細菌或真菌污染

　　建議解決方法

　　丟棄培養(yǎng)物，或用抗生素除菌。

　　問題4：培養(yǎng)細胞不貼壁

　　可能原因

　?。?）*消化過度

　　（2）支原體污染

　?。?）培養(yǎng)瓶瓶底不干凈

　　（4）培養(yǎng)液pH值過堿（NaHCO3分解）

　?。?）消化液或培養(yǎng)液配制錯誤、過期儲存、儲存不當

　?。?）細胞老化（如傳代前細胞已匯合導(dǎo)致失去貼附性）

　?。?）接種細胞起始濃度太低或太高

　　建議解決方法

　　（1）縮短*消化時間或降低*濃度。

　　（2）分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。

　?。?）注意刷洗，或換用一次性塑料培養(yǎng)瓶

　?。?）使用無菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無菌CO2（將培養(yǎng)液敞口放入培養(yǎng)箱也可）

　?。?）重新配置消化液或培養(yǎng)液

　　（6）啟用新的保種細胞

　?。?）調(diào)節(jié)*接種細胞濃度

　　問題5：懸浮細胞成簇

　　可能原因

　?。?）培養(yǎng)液中含鈣、鎂離子

　　（2）支原體污染

　?。?）蛋白酶過度消化使得細胞裂解釋

　　（4）DNA污染

　　建議解決方法

　?。?）用無鈣鎂*洗滌細胞，輕輕吹吸細胞獲得單細胞懸液。

　　（2）分離培養(yǎng)物，檢測支原體。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。

　?。?）用DNase I 處理細胞。

　　問題6：原代細胞培養(yǎng)物污染

　　可能原因

　　原代培養(yǎng)組織在進入培養(yǎng)前已污染

　　建議解決方法

　　培養(yǎng)前用含高濃度抗生素的*反復(fù)沖洗組織。

　　問題7：培養(yǎng)細胞生長減慢

　　可能原因

　　（1）由于更換不同培養(yǎng)液或血清

　?。?）培養(yǎng)液中一些細胞生長必需成分如*或生長因子耗盡或缺乏或已被破壞。

　　（3）培養(yǎng)物中有少量細菌或真菌污染

　?。?）試劑保存不當

　?。?）接種細胞起始濃度太低

　?。?）細胞已老化

　?。?）支原體污染

　　建議解決方法

　?。?）比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，比較新血清與舊血清支持細胞生長實驗。讓細胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液。

　?。?）換入新鮮配制培養(yǎng)液，或補加*及生長因子。

　?。?）用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)污染，丟棄培養(yǎng)物?；蛴每股爻?br />
　?。?）血清需保存在-5℃ 到-20℃。培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存。含血清*培養(yǎng)液在2-8℃保存，并在2 周內(nèi)用完。

　?。?）增加接種細胞起始濃度。

　?。?）換用新的保種細胞。

　?。?）分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。

　　問題8：培養(yǎng)細胞死亡

　　可能原因

　　（1）培養(yǎng)箱內(nèi)無CO2

　?。?）培養(yǎng)箱內(nèi)溫度波動太大

　?。?）細胞凍存或復(fù)蘇過程中損傷

　?。?）培養(yǎng)液滲透壓不正確

　　（5）培養(yǎng)液種有毒代謝產(chǎn)物堆積

　?。?）更多原因參考問題4和問題7

　　建議解決方法

　　（1）檢測培養(yǎng)箱內(nèi)CO2

　?。?）檢查培養(yǎng)箱內(nèi)溫度

　?。?）取新的保存細胞種

　?。?）檢測培養(yǎng)液滲透壓。注意：大多數(shù)哺乳動物細胞能耐受滲透壓為260 – 350 mOsm。加入額外試劑如HEPES或藥物都有可能影響培養(yǎng)液滲透壓。

　?。?）換入新鮮培養(yǎng)液

　　（6）更多解決方法參考問題4和問題7