問題

可能原因

防止方法

(一)
顯色淡
靈敏度偏低

1．試劑盒在運輸途中時間太長，溫度太高

試劑盒置保溫箱內(nèi)運輸，并放足夠數(shù)量的冰塊，盡量縮短運輸時間

2．試劑盒超過有效期

超過效期試劑盒不要使用

3．試劑、樣品用前未能平衡

用前試劑、樣品置室溫平衡 30分鐘左右

4．試劑開啟時間過長長菌

試劑開啟后請盡量在短時間內(nèi)用完

5．移液器吸量不足，移液抽吸排放太快，吸頭內(nèi)壁掛液太多或內(nèi)壁不清潔

校正移液器，吸頭要配套，每次裝吸頭要吻合緊密。移液不宜過快，排放應(yīng)*。吸頭內(nèi)壁要清潔，一次性使用。

6．恒溫箱溫度不足37℃或水浴鍋水溫度不足37℃)

放入反應(yīng)板時注意培養(yǎng)箱溫度，及時調(diào)整，孵育反應(yīng)期間開啟不宜太多，影響溫度平衡。

7．孵育反應(yīng)時間不足

定時鐘準(zhǔn)確定時

8．洗滌時沖擊力太大，洗滌液浸泡時間太長，洗滌次數(shù)增加

減少洗滌沖擊力，按說明書要求保留洗滌時間，準(zhǔn)確記住洗滌次數(shù)

9．顯色劑滴加量不足或順序顛倒，或混合后加入

滴加顯色液時，滴瓶垂直向下，持力均勻，滴速不宜過快，先加顯色劑 A，反加顯色劑B，不可將A、B液混合后加入

10．顯色劑反應(yīng)時間不足

準(zhǔn)確定時

11．蒸餾水水質(zhì)有問題

測定蒸餾水配制試劑對酶免疫法的影響

12．樣品和NaN 3 防腐，抑制了酶的反應(yīng)

樣品不能加 NaN 3 防腐

(二)
重復(fù)性差

1．對于定量產(chǎn)品，沒帶標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品，采用以前的標(biāo)準(zhǔn)線

每次試驗都必須帶標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品

2．樣品數(shù)量多少不一，加樣時間有長有短

重復(fù)某一樣品時，加樣時間盡可能與*次接近

3．樣本加入后未混勻

加樣后在混勻器上充分混勻

4．移液器加樣量不一致

盡可能使用同一移液器和裝緊吸頭移液時用力及抽吸速度一致

5．酶標(biāo)儀濾光片不對或輸入波長不對

TMB顯色用450或450/630nm雙波長

6．酶標(biāo)儀測定重復(fù)性差

校準(zhǔn)酶標(biāo)儀

7．操作過程個別孔液體外濺

穩(wěn)拿穩(wěn)放，防止外濺

8．不同批號試劑盒中組分混淆

不同批號試劑，不能混用

9．瓶蓋相互交叉使用

不同組分瓶蓋間不能交叉使用

10．獻(xiàn)血員冒名頂替

嚴(yán)格管理獻(xiàn)血員

11．保溫時間不一致

重復(fù)測定標(biāo)本，反應(yīng)條件、人員等盡可能與上次保持一致，以排除這些因素造成不一致的可能性，計時應(yīng)以*滴 TMB的B液加入開始計時

12．洗滌條件不一致

13．顯色條件時間不一致

14．操作人員不一致

15．洗滌不正確

用洗液注滿各孔，但不要溢出。甩板時反應(yīng)板面向下，垂直用力甩凈內(nèi)容物(可多甩幾次)，在干凈、無或少塵的吸水材料上拍干。洗板機洗板時不應(yīng)有堵孔，洗滌應(yīng)充分

16．溫育條件不一致(一次用水浴，一次用恒溫箱)

恒溫箱溫育較水浴顯色深， OD值高出0.10-0.15,均采用恒溫箱，沒有恒溫箱者，水浴鍋的水溫應(yīng)控制在37℃

17．唾液或其它雜物掉入孔內(nèi)

用記號筆直圈上，便于分析

18．不慎加酶或底物液于孔壁上，有殘留

用吸水紙吸干壁上殘留的酶或底物液

19．不慎多加或少加酶或顯色劑B

多加時顯色深，少加則淺，用記號筆圈上，便于分析

20．閾值附近時陰時陽

重復(fù)做奇數(shù)次，以偶數(shù)次結(jié)果為準(zhǔn)

21．標(biāo)本離心處理不全，致使檢測時于反應(yīng)板孔內(nèi)發(fā)生凝血現(xiàn)象或殘留細(xì)胞成分干擾

血清或血漿應(yīng)充分離心處理， 3000rpm6分鐘以上