小鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA KIT 

ELISA試劑盒操作步驟和注意事項
試劑盒組成：48孔/96孔
主要用途：科研檢測
產(chǎn)品規(guī)格：96T/48T
96T指可以做94個標本，2個標準對照
48T指可以做47個標本，1個標準對照
96T-84個樣本
48T-42個樣本
有效期：6個月 
保存：2-8℃
ELISA試劑盒操作步驟 
實驗開始前，請?zhí)崆芭渲煤盟性噭噭┗驑悠废♂寱r，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應(yīng)該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。 
1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標準孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。
為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。 
2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加*標記抗體工作液 100μl（取1μl*標記抗體加99μl*標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制），37℃,60分鐘。 
3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。 
4. 每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液（同*標記抗體工作液） 100μl，37℃，60分鐘。 
5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。 
6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。 
7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準確性，底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。 
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行檢測。 
注： 
1. 用戶在初次使用試劑盒時，應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到管底。 
2. 每次實驗留一孔作為空白調(diào)零孔，該孔不加任何試劑，只是zui后加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調(diào)OD值至零。
3. 為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標板加上蓋或覆膜。 
4. 未使用完的酶標板或者試劑，請于2-8℃保存。標準品、*標記抗體工作液、辣根過氧化物酶標記親和素工作液請依據(jù)所需的量配置使用。請勿重復(fù)使用已稀釋過的標準品、*標記抗體工作液、或辣根過氧化物酶標記親和素工作液。 
5. 建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準確性。 
需要而未提供的試劑和器材 
1. 標準規(guī)格酶標儀 
2. 高速離心機 
3. 電熱恒溫培養(yǎng)箱 
4. 干凈的試管和Eppendof管 
5. 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，用多通道移液器 
6. 蒸餾水，容量瓶等 
洗板方法 
手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將*的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。 
自動洗板：如果有自動洗板機，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中。 
計算 
以標準物的濃度為橫坐標（對數(shù)坐標），OD值為縱坐標（普通坐標），在半對數(shù)坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。 
ELISA試劑盒注意事項 
1. 當(dāng)混合蛋白溶液時應(yīng)盡量輕緩，避免起泡。 
2. 洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。 
3. 一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，*使用排槍加樣。 
4. 請每次測定的同時做標準曲線，做復(fù)孔。 
5. 如標本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)。 
6. 在配制標準品、檢測溶液工作液時，請以相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。 
7. 底物請避光保存。 
8. 不要用其它生產(chǎn)廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。
產(chǎn)品用途：科研ELISA檢測試劑盒.本公司可提供實驗代測服務(wù).
檢測原理： 采用雙抗體夾心ABC-ELISA法 
產(chǎn)品種屬齊全有：人，小鼠，大鼠，豚鼠，豬，犬，兔，牛，羊，猴，兔，馬等動物種屬。
待檢樣本：體液，血清，血漿，細胞培養(yǎng)上清液，尿液，組織勻漿,心房水標本等等。
保存條件：2-8℃
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