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當(dāng)前位置：上海必泰生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>關(guān)于WB實(shí)驗(yàn)中的NC膜你知道多少？
首先了解下，體外診斷原料的NC和蛋白轉(zhuǎn)移的NC是有區(qū)別的：體外診斷原料的NC膜是作為核心載體原料，孔徑在10-15μm，帶背襯。而蛋白轉(zhuǎn)移的NC膜，一般用于WB實(shí)驗(yàn)，孔徑0.22um和0.45um，不帶背襯。
其次用在免疫印跡中最常規(guī)的膜的類型是硝酸纖維素膜（NC 膜）和聚偏氟乙烯（PVDF）膜。兩者主要區(qū)別：
| 產(chǎn)品 | Biotrace NT 膜 | FluoroTrans W PVDF 膜 |
| 推薦貨號 | 66485 | BSP0161 |
| 描述 | 純硝酸纖維素，0.22μm | 聚偏氟乙烯，0.2μm |
| 應(yīng)用 | 蛋白轉(zhuǎn)移 核酸檢測 ELISA | 蛋白轉(zhuǎn)移 蛋白點(diǎn)或條印跡 免疫染色檢測 |
| 優(yōu)勢 | 高靈敏度 低背景 | 最高的靈敏度 低背景 低 burn through 高結(jié)合力 化學(xué)品抗性 高拉伸強(qiáng)度 |
| 結(jié)合反應(yīng) | 疏水和靜電 | 疏水（甲醇浸泡） |
| 固定方法 | Western 轉(zhuǎn)移點(diǎn)或條印跡 烤和紫外交聯(lián)（用于核酸） | Western 轉(zhuǎn)移點(diǎn)或條印跡 |
轉(zhuǎn)印膜的免疫印跡常見問題分析與解決方案
| 問題 | 可能原因 | 解決方案 |
| 沒有陽性條帶或很弱 | 抗體活性低或效價低 | 分裝和在零下 20 度儲存抗體溶液以及避免多次反復(fù)凍融。使用更高濃度的一抗。 |
| 轉(zhuǎn)膜不充分（轉(zhuǎn)膜后通過凝膠染色得到了確認(rèn)） | 增加轉(zhuǎn)膜的時間。降低轉(zhuǎn)膜緩沖液中甲醇的濃度。 加入 0.1%的 SDS 能夠幫助大蛋白的轉(zhuǎn)膜。 | |
| 低的偶聯(lián)活性 | 確保膠和膜之間沒有氣泡。使用不含 SDS 的轉(zhuǎn)膜緩沖液。如果使用的是 Biotrace NT 膜，則需在轉(zhuǎn)膜緩沖液中加入甲醇 | |
| 封閉劑干擾了抗體的結(jié)合 | 在 4 度儲存偶聯(lián)物。增加偶聯(lián)物的濃度或孵育時間。 | |
| 背景高 | 使用一個不同的封閉劑。 | |
| 抗體和酶偶聯(lián)的效果差 | 顏色反應(yīng)時間太長 | 當(dāng)需要的顏色深度達(dá)到之后立即停止反應(yīng) |
| 封閉不全 | 使用親和純化的二抗。 | |
| 封閉劑中存在磷酸酶或過氧化物酶的活性 | 增加封閉時間。使用一個不同的封閉劑。 | |
| 背景點(diǎn)狀物 | 緩沖液中存在顆粒 | 試劑使用前用過濾器過濾。 |
| 假陽性或點(diǎn)狀 | 一抗的交叉反應(yīng) | 進(jìn)一步純化或預(yù)吸附膜抗體。如果條件可以的話使用單抗。降低一抗的濃度。 |
| 樣本中存在磷酸酶或過氧化物酶的活性（通過在檢測中不加一抗和二抗得到確認(rèn)） | 在封閉前通過 80 度 20 分鐘加熱來失活酶的活性。 |
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