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上海逸研生物科技有限公司
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更新時間:2017-10-13 23:53:50瀏覽次數(shù):463次
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Human ATP-binding cassette sub-family A member 13(ABCA13) ELISA kit
其他種屬: Mouse
待測物名稱: ATP-binding cassette, sub-family A (ABC1), member 13
檢測范圍: 18.75 pg/ml-1200 pg/ml
靈敏度: 4.69 pg/ml
別名:DKFZp313D2411, FLJ16398, FLJ33876, FLJ33951, ATP binding cassette transporter A13|ATP binding cassette, sub-family A (ABC1), member 13
蛋白功能1:Transport
蛋白功能3:Transport
Human ABCA13 ELISA kit
【預期應用】ELISA 法定量測定血清、血漿、細胞培養(yǎng)物上清、組織裂解液中ABCA13含量。
【產(chǎn)品性能指標】
1、檢測范圍:15.6 pg/ml-1000 pg/ml
2、靈敏度:3.9 pg/ml
3、精密度:批內(nèi)差CV%<8%,批間差CV%<10%
Human ABCA13 ELISA kit【實驗原理】
用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗ABCA13抗體的微孔中依次加入標本或標準品、
*化的抗ABCA13抗體、HRP 標記的親和素,經(jīng)過*洗滌后用底物TMB 顯色。TMB 在過
氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣本中的ABCA13呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣本濃度。
【試劑盒組成成分】
組份48T/96T
酶標板 (Assay plate) 12 條×8 孔
標準品 (Standard) 2 瓶 (凍干品)
*標記抗體 (Biotin-antibody) 1 x 120 μl/瓶 (100×)A
辣根過氧化物酶標記親和素 (HRP-avidin) 1 x 120 μl/瓶 (100×)
*標記抗體稀釋液 (Biotin-antibody Diluent) 1 x 15 ml/瓶
辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent) 1 x 15 ml/瓶
* (Sample Diluent) 1 x 50 ml/瓶
濃洗滌液 (Wash Buffer) 1 x 20 ml/瓶 (25×)
底物溶液 (TMB Substrate) 1 x 10 ml/瓶
終止液 (Stop Solution) 1 x 10 ml/瓶
板貼4
【所需試劑和器材】
標準規(guī)格酶標儀;高速離心機;電熱恒溫培養(yǎng)箱;干凈的試管和離心管;容量瓶;
系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭;多通道移液器;蒸餾水等
【樣本采集及保存】
1、血清:全血標本請于室溫放置2 小時或4°C 過夜后于2 - 8°C 1000 x g 離心15 分鐘,取
上清即可立即檢測;或進行分裝,并將標本放于-20°C 或-80°C 保存,但應避免反復凍融。
解凍后的樣品應再次離心,然后檢測。
2、血漿:可用EDTA 或肝素作為抗凝劑,標本采集后30 分鐘內(nèi)于2 - 8°C 1000 g 離心15
分鐘,取上清即可立即檢測;或進行分裝,并將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反
復凍融。解凍后的樣本應再次離心,然后檢測。
3、細胞培養(yǎng)物上清:標本于2 - 8°C 1000 x g 離心15 分鐘取上清,上清立即用于實驗,或
分裝后于-20°C 或-80°C 保存。避免反復凍融。
4、組織裂解液:取100mg 組織,用1X PBS 洗去血污。剪成小塊放入組織研磨器(勻漿管)中,加入1 ml 1X PBS,制成勻漿,然后置于-20°C 過夜。經(jīng)過反復凍融2 次處理破壞細
胞膜后,將組織勻漿于2 - 8°C 5000 g 離心5 分鐘取上清。取適量上清液立即進行實驗,
或?qū)⑸锨宸盅b保存于-20°C 或-80°C 。解凍后的樣本應再次離心,然后檢測。避免反復凍
融。
注:標本溶血會影響zui后檢測結(jié)果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。
【試劑配制】
1、 標準品
(1) 從試劑盒中取出一支標準品,于6000-10000rpm 離心30 秒。用1ml *溶解,并
用吸頭對準凍存管底部反復吸打5 次以助溶解,充分混勻得到標準品S7,放置備用。
(2) 取7 個1.5 ml 離心管(S0-S6)依次排列,各加入250μl *。吸取250μl 標準品
S7 到*個離心管中(S6),輕輕吹打混勻。從S6 中吸取250μl 到第二個EP 管中(S5),
輕輕吹打混勻。以此類推進行標準品的倍比稀釋。S0 為*。
2、 洗液工作液
濃洗滌液按1:25倍用去離子水進行稀釋。例如用量筒量取240ml去離子水,倒入燒杯或其
他潔凈容器中,再量取10ml濃洗滌液,均勻加入,攪拌混勻,在臨用前配妥。濃洗滌液低溫保
存會有鹽析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶。
3、 *標記抗體工作液
*標記抗體液按1:100倍用*標記抗體稀釋液進行稀釋。如10μl*標記抗體加
990μl*標記抗體稀釋液,輕輕混勻,在臨用前10分鐘內(nèi)配妥。
4、 辣根過氧化物酶標記親和素工作液
辣根過氧化物酶標記親和素按1:100倍用辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液進行稀釋。如
10μl辣根過氧化物酶標記親和素加990μl辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液,輕輕混勻,在臨用
前10分鐘內(nèi)配妥。
【重要提示】
1、實驗開始前,請?zhí)崆芭渲煤盟性噭?。試劑或樣本稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起
泡。
2、用戶在初次使用試劑盒時,應將各種試劑管離心數(shù)分鐘,以便管蓋和管壁上的液體集中到
管底。
3、在配制標準品、檢測溶液工作液時,請以相應的稀釋液配制,不能混淆。
4、 因?qū)嶋H裝量多于標示裝量,配制工作試劑請用精準的計量工具(移液器或量筒等)量取,
切勿不經(jīng)量取直接使用。
5、標準品、*標記抗體工作液、辣根過氧化物酶標記親和素工作液稀釋前根據(jù)預先計算
好的每次實驗所需的總量配制,實際配制時應多配制0.1-0.4ml。請勿重復使用已稀釋過
的標準品、*標記抗體工作液、或辣根過氧化物酶標記親和素工作液。
6、標準品的稀釋請勿于板中進行,標準品應于臨用前15 分鐘內(nèi)配制。為保證實驗有效性,
建議每次實驗使用新的標準品。若保存得當,溶解后的標準品S7 可在2-8℃保存,7 天內(nèi)
使用有效。
【操作步驟】
1、將各種試劑移至室溫(18-25℃)平衡至少30 分鐘,按前述方法配制試劑,備用。
2、加樣:分別設標準品孔、待測樣本孔。每孔分別加標準品或待測樣本100μl,輕輕晃動混
勻,覆上板貼,37℃溫育2 小時。
3、棄去液體,甩干,不用洗滌。
4、每孔加*標記抗體工作液100μl,覆上新的板貼,37℃溫育1 小時。
5、棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3 次。每次浸泡2 分鐘,200μl/每孔,甩干。
6、每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液100μl,覆上新的板貼,37℃溫育1 小時。
7、棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5 次。每次浸泡2 分鐘,200μl/每孔,甩干。
8、依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色15-30 分鐘。
9、依序每孔加終止溶液50μl,終止反應。
10、在反應終止后5 分鐘內(nèi)用酶標儀在450nm 波長依序測量各孔的光密度(OD 值)。
【操作要點】
1、為保證檢測結(jié)果的準確性,建議標準品及樣本均設雙孔測定。每次檢測均需做標準曲線。
2、如標本中待測物質(zhì)含量過高,請先用*進行稀釋,以使樣本符合試劑盒的檢測范
圍,zui后計算時再乘以相應的稀釋倍數(shù)。
3、 加樣:加樣時,請使用一次性的潔凈吸頭,避免交叉污染。加樣時應盡量輕緩,避免起泡,
將樣本加于酶標板孔底部,切勿沿孔壁加樣。一次加樣時間控制在10 分鐘內(nèi),如標
本數(shù)量多,*使用移液器加樣。
4、 溫育:為防止樣本蒸發(fā)或污染,溫育過程中酶標板必須覆上板貼,實驗過程中酶標板應避
免處于干燥的狀態(tài)。溫育過程中應隨時觀察溫箱溫度是否恒定于37℃,及時調(diào)整。溫育
過程中,溫箱不易開啟太多次,以免影響溫度平衡。
5、 洗滌:洗滌過程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。
(1) 手工洗板方法:吸去(不可觸及孔壁和孔底)或甩掉酶標板內(nèi)的液體;在實驗臺上鋪
墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將*的洗滌緩沖液按200μl/孔注入孔內(nèi),
浸泡2 分鐘。根據(jù)操作步驟中所述,重復此過程數(shù)次。
(2) 自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
6、 顯色:為保證實驗結(jié)果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液??稍诩尤氲孜锶?/span>
液后每隔一段時間觀察一下顯色情況以控制反應時間(比如每隔10 分鐘)。當肉眼可見標
準品前3-4 孔有明顯梯度藍色,后3-4 孔顯色不明顯時,即可加入終止液終止反應,此時
藍色立刻變?yōu)辄S色。終止液的加入順序應盡量與底物溶液的加入順序相同。
7、底物溶液應為淺藍色或無色,如果顏色嚴重變深則必須棄用。底物溶液易受污染,請避光
妥善保存。
【數(shù)據(jù)處理】
可將標準品及樣本值減去S0 孔數(shù)值后繪制曲線,如果設置復孔,則應取其平均值計算。以標
準品的濃度為縱坐標(對數(shù)坐標),OD 值為橫坐標(對數(shù)坐標),在對數(shù)坐標紙上繪出標準曲
線。*使用專業(yè)制作曲線軟件進行分析,可從我們的下載專業(yè)軟件"Curve Expert 1.3",
并根據(jù)提示制作標準曲線。根據(jù)樣本OD 值,由標準曲線查出相應的濃度;或用標準品的濃度
與 OD 值計算出標準曲線的回歸方程式,將樣本的OD 值代入方程式,計算出樣本濃度。若樣
本檢測前進行過稀釋,zui后計算時需乘以相應的稀釋倍數(shù),即為樣本的實際濃度。
【說明】
1、本試劑盒僅供研究使用。
2、中、英文說明書可能會有不*之處,請以英文說明書為準。
3、本操作說明也適用于48T 試劑盒。48T 試劑盒中酶標板、標準品、*標記抗體及辣根
過氧化物酶標記親和素數(shù)量減半。
4、不同批號試劑不能混用。不要用其它生產(chǎn)廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。
5、剛開啟的酶標板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì),此為正?,F(xiàn)象,不會對實驗結(jié)果造成任何
影響。
上海逸研生物科技有限公司專業(yè)從事于elisa試劑盒的銷售及elisa待測服務,代理國內(nèi)外的elisa試劑盒,并自主研發(fā)常規(guī)elisa試劑盒,質(zhì)量*,*,歡迎廣大客戶和訂購,代理品牌:RD代理、eBioscinece代理、biovision代理、華美CUSABIO代理、優(yōu)爾生代理、博士德代理等。
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