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KB細胞人口腔上皮癌細胞培養(yǎng)方法
1、收到細胞,請查看瓶子是否有破裂,培養(yǎng)基是否漏出,是否渾濁,如有請盡快。
2、收到細胞,如包裝完好,請在顯微鏡下觀察細胞。,由于運輸過程中的問題,細胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細胞有可能從瓶壁中脫落下來,顯微鏡下觀察會出現(xiàn)細胞懸浮的情況,出現(xiàn)此狀態(tài)時,請不要打開細胞培養(yǎng)瓶,應立即將培養(yǎng)瓶置于細胞培養(yǎng)箱里靜止3-5小時左右,讓細胞先穩(wěn)定下,再于顯微鏡下觀察,此時多數細胞會重新貼附于瓶壁。如細胞仍不能貼壁,請用臺盼藍染色法鑒定細胞活力,如臺盼藍染色證實細胞活力正常請按懸浮細胞的方法處理
3. 收到細胞時如無異常情況 ,請在顯微鏡下觀察細胞密度,如為貼壁細胞,未超過80%匯合度時,將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基吸出,留下 5-10ML培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng):超過80%匯合度時,請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞,吸出培養(yǎng)液,1000轉/分鐘離心3分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。
4,將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),蓋子微微擰松。吸出的培養(yǎng)基可以保存在滅菌過的瓶子里,存放于4℃冰箱,以備不時之需。
5 、24小時后,細胞形態(tài)已恢復并貼滿瓶壁,就可以傳代了。(貼壁細胞)將培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基倒去,加3-5ml(以能覆蓋細胞生長面為準)PBS或Hanks’液洗滌后棄去。加0.5-1ml 0.25%含EDTA的*消化,消化時間以具體細胞為準,一般1-3分鐘,不超過5分鐘??梢苑湃?7℃培養(yǎng)箱消化。輕輕晃動瓶壁,見細胞脫落下來,加入3-5ml培養(yǎng)基終止消化。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細胞,使之*脫落,然后將溶液吸入離心管內離心,1000rpm/5min。棄上清,視細胞數量決定分瓶數,一般一傳二,如細胞量多可一傳三,有些細胞不易傳得過稀,有些生長較快的細胞則可以多傳幾瓶,以具體細胞和經驗為準。(懸浮細胞)用移液管輕輕吹打瓶壁,直接將溶液吸入離心管離心即可。
6,貼壁細胞 ,懸浮細胞。嚴格無菌操作。換液時,換新的細胞培養(yǎng)瓶和換新鮮的培養(yǎng)液,37度 5%CO2 培養(yǎng)
7. 收到細胞后,請鏡下觀察細胞,用恰當方式處理細胞。若懸浮的細胞較多,請離心收集細胞,接種到一個新的培養(yǎng)瓶中。棄掉原液,使用新鮮配制的培養(yǎng)基,使用進口胎牛血清. 剛接到細胞,若細胞不多時 血清濃度可以加到15%去培養(yǎng)。若細胞迏到80%左右 ,血清濃度還是在10%。
培養(yǎng)基參考
500ml基礎培養(yǎng)基(含:必需與非必需氨基酸、維他命、有機與無機成分、激素、生長因子與微量元素)、細胞生長添加劑、抗生素/抗菌素溶液或*/*(P/S)溶液、FBS,適合在飽和濕度為5%CO2與95%空氣的培養(yǎng)箱中使用
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人葡萄糖激酶調節(jié)蛋白(GKRP)ELISA試劑盒
人血凝素(HA)ELISA試劑盒
人脂肪分化相關蛋白(ADRP)ELISA試劑盒
人鈣調結合蛋白(CALD)ELISA試劑盒
人鈣調磷酸酶(CaN)ELISA試劑盒
人骨退化特異標志物(CTX-2)ELISA試劑盒
人鈣結合蛋白(CR)ELISA試劑盒
人骨形成蛋白6(BMP-6)ELISA試劑盒
人脂肪酸結合蛋白(FABP)ELISA試劑盒
人腺苷三磷酸結合盒轉運體A1(ABCA1)ELISA試劑盒
人羥*糖蛋白(HRGP)ELISA試劑盒
人葡萄糖轉運蛋白1(GLUT1)ELISA試劑盒
人低密度脂蛋白(LDL)ELISA試劑盒
人花生四烯酸(AA)ELISA試劑盒
人骨涎蛋白(BSP)ELISA試劑盒
人骨堿性磷酸酶(BALP)ELISA試劑盒
人*(CTX)ELISA試劑盒
人1,3-二磷酸甘油酸(1,3-DPG)ELISA試劑盒
人1,5-脫水葡萄糖醇/1,5-脫水山梨(1,5-AG)ELISA試劑盒
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人高密度脂蛋白*(HDL-C)ELISA試劑盒
人N端中段骨鈣素(N-MID-OT)ELISA試劑盒
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人極低密度脂蛋白受體(VLDLR)ELISA試劑盒
人低密度脂蛋白受體(LDLR)ELISA試劑盒
人高密度脂蛋白(HDL)ELISA試劑盒
人α*S轉移酶(α-GST)ELISA試劑盒
人同型半*(Hcy)ELISA試劑盒
人游離脂肪酸(FFA)ELISA試劑盒
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人內毒素(ET)ELISA試劑盒
人過氧化物酶體增殖因子活化受體γ( PPAR-γ)ELISA試劑盒
人*A(CsA)ELISA試劑盒
人神經膠質纖維酸性蛋白(GFAP)ELISA試劑盒
人15脂加氧酶(15-LO/LOX)ELISA試劑盒
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人白三烯C4(LTC4)ELISA試劑盒
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