人肺鱗癌細(xì)胞系 NCI-H226本公司代理美國(guó)ATCC，理德DSMZ，ScienCell德國(guó)細(xì)胞庫(kù)，ECACC,ICLC,DSMZ的細(xì)胞株以及菌株等品牌細(xì)胞。齊一生物大量庫(kù)存ATCC 細(xì)胞，癌細(xì)胞，正常細(xì)胞，*，質(zhì)量保證，公司秉承“誠(chéng)信、專業(yè)、高效"的經(jīng)營(yíng)理念為廣大客戶服務(wù)。歡迎各位老師！齊一生物科技(上海）有限公司：

人肺鱗癌細(xì)胞系 NCI-H226細(xì)胞培養(yǎng)方法 
1、收到細(xì)胞，請(qǐng)查看瓶子是否有破裂，培養(yǎng)基是否漏出，是否渾濁，如有請(qǐng)盡快。
2、收到細(xì)胞，如包裝完好，請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞。,由于運(yùn)輸過(guò)程中的問(wèn)題，細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞有可能從瓶壁中脫落下來(lái)，顯微鏡下觀察會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞懸浮的情況，出現(xiàn)此狀態(tài)時(shí)，請(qǐng)不要打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶，應(yīng)立即將培養(yǎng)瓶置于細(xì)胞培養(yǎng)箱里靜止3-5小時(shí)左右，讓細(xì)胞先穩(wěn)定下，再于顯微鏡下觀察，此時(shí)多數(shù)細(xì)胞會(huì)重新貼附于瓶壁。如細(xì)胞仍不能貼壁，請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，如臺(tái)盼藍(lán)染色證實(shí)細(xì)胞活力正常請(qǐng)按懸浮細(xì)胞的方法處理
3. 收到細(xì)胞時(shí)如無(wú)異常情況 ，請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度，如為貼壁細(xì)胞，未超過(guò)80%匯合度時(shí)，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基吸出，留下 5-10ML培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)：超過(guò)80%匯合度時(shí)，請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞，吸出培養(yǎng)液，1000轉(zhuǎn)/分鐘離心3分鐘，吸出上清，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
4，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，蓋子微微擰松。吸出的培養(yǎng)基可以保存在滅菌過(guò)的瓶子里，存放于4℃冰箱，以備不時(shí)之需。
5 、24小時(shí)后，細(xì)胞形態(tài)已恢復(fù)并貼滿瓶壁，就可以傳代了。（貼壁細(xì)胞）將培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基倒去，加3-5ml（以能覆蓋細(xì)胞生長(zhǎng)面為準(zhǔn)）PBS或Hanks’液洗滌后棄去。加0.5-1ml  0.25%含EDTA的胰酶消化，消化時(shí)間以具體細(xì)胞為準(zhǔn)，一般1-3分鐘，不超過(guò)5分鐘?？梢苑湃?7℃培養(yǎng)箱消化。輕輕晃動(dòng)瓶壁，見(jiàn)細(xì)胞脫落下來(lái)，加入3-5ml培養(yǎng)基終止消化。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞，使之*脫落，然后將溶液吸入離心管內(nèi)離心，1000rpm/5min。棄上清，視細(xì)胞數(shù)量決定分瓶數(shù)，一般一傳二，如細(xì)胞量多可一傳三，有些細(xì)胞不易傳得過(guò)稀，有些生長(zhǎng)較快的細(xì)胞則可以多傳幾瓶，以具體細(xì)胞和經(jīng)驗(yàn)為準(zhǔn)。（懸浮細(xì)胞）用移液管輕輕吹打瓶壁，直接將溶液吸入離心管離心即可。
6，貼壁細(xì)胞 ，懸浮細(xì)胞。嚴(yán)格無(wú)菌操作。換液時(shí)，換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和換新鮮的培養(yǎng)液，37度    5%CO2 培養(yǎng)
7.  收到細(xì)胞后，請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞，用恰當(dāng)方式處理細(xì)胞。若懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)離心收集細(xì)胞，接種到一個(gè)新的培養(yǎng)瓶中。棄掉原液，使用新鮮配制的培養(yǎng)基，使用進(jìn)口胎牛血清. 剛接到細(xì)胞，若細(xì)胞不多時(shí) 血清濃度可以加到15％去培養(yǎng)。若細(xì)胞迏到80%左右 ，血清濃度還是在10％。
培養(yǎng)基參考
500ml基礎(chǔ)培養(yǎng)基（含：必需與非必需氨基酸、維他命、有機(jī)與無(wú)機(jī)成分、激素、生長(zhǎng)因子與微量元素）、細(xì)胞生長(zhǎng)添加劑、抗生素/抗菌素溶液或青霉素/鏈霉素（P/S）溶液、FBS，適合在飽和濕度為5%CO2與95%空氣的培養(yǎng)箱中使用

一、細(xì)胞操作參考書(shū)
二、生長(zhǎng)特性：貼壁    懸浮
三、細(xì)胞生長(zhǎng)條件：
培養(yǎng)基                  90%              （GIBCO）
血清              10%  FBS（GIBCO）
溫度                       37℃
空氣條件      5% CO2，,95% AIR
生長(zhǎng)代數(shù)    P4
凍存條件    培養(yǎng)基70%、血清20%、DMSO10%
四、組成：
組份    規(guī)格
細(xì)胞一瓶    T25
細(xì)胞培養(yǎng)與操作說(shuō)明    1份
五、細(xì)胞接收后的操作流程與注意事項(xiàng)
1.如果細(xì)胞為貼壁細(xì)胞，，而收到時(shí)呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài)，請(qǐng)將懸浮的細(xì)胞即時(shí)離心，加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天；同時(shí)原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細(xì)胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基，培養(yǎng)3天。3天后若原瓶或者新瓶中的細(xì)胞都沒(méi)有出現(xiàn)增殖而是繼續(xù)脫落死亡，請(qǐng)及時(shí)實(shí)驗(yàn)室，技術(shù)人員會(huì)跟進(jìn)解決
2.貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢：適當(dāng)提高血清濃度（zui高不能超過(guò)20%），或可根據(jù)該細(xì)胞生長(zhǎng)密度，考慮胰酶消化后，轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng)
3.生長(zhǎng)不均：貼壁細(xì)胞若出現(xiàn)分布不均，成島狀生長(zhǎng)，可將細(xì)胞進(jìn)行消化，重懸打散細(xì)胞，加入新鮮培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)

六、細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程（請(qǐng)嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作）
1．吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次，加2~3 ml  0.25%胰酶進(jìn)行消化細(xì)胞（注意把握消化時(shí)間，通?？刂圃?-2min）
2．鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)（不建議消化到細(xì)胞漂浮）去掉胰酶，加6~8ml *培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散
3．取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)?培養(yǎng)基，，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)
4．注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細(xì)胞密度達(dá)到80%以后重復(fù)1項(xiàng)操作或者凍存
特別注意：（如使用公共實(shí)驗(yàn)室或初次接觸細(xì)胞培養(yǎng)，建議添加雙抗培養(yǎng)）
1.收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快更換為含15%血清的新鮮培養(yǎng)基，如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基，請(qǐng)?jiān)谠颗囵B(yǎng)基中額外添加10%的血清（原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時(shí)間zui長(zhǎng)不宜超過(guò)72小時(shí)）
2.貼壁細(xì)胞收到當(dāng)天切忌立刻消化，請(qǐng)將細(xì)胞放置培養(yǎng)箱孵育過(guò)夜到第二天再做消化傳代
如簽收時(shí)出現(xiàn)培養(yǎng)瓶壁破裂，漏液等情況請(qǐng)及時(shí)做好照片記錄并實(shí)驗(yàn)室
Albumin, bovine, fraction V, heat shock isolation pH 7.0 牛血清白蛋白    [9048-46-8]
Naphthol AS-D acetate 萘酚AS-D-乙酸酯    [528-66-5]
Albumin, bovine Solution, 20 mg/ml 牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液    /
Albumin, bovine Solution, 0.5mg/ml 牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液    /
Alcian blue 8GX 阿爾新藍(lán)8GX    [33864-99-2]
Alcian blue 8GX 阿爾新藍(lán)8GX    [33864-99-2]
Alcohol dehydrogenase >300U/mg 乙醇脫氫酶    [9031-72-5]
Alizarin 茜素    [72-48-0]
Alizarin complexone 茜素絡(luò)合指示劑    [3952-78-1]
Alizarin red 茜素紅    [130-22-3]
Alcohol dehydrogenase >300U/mg 乙醇脫氫酶    [9031-72-5]
Alendronate sodium, trihydrate 阿侖膦酸鈉    [121268-17-5]
Alizarin yellow GG 茜素黃 GG    [584-42-9]
Alizarin yellow GG 茜素黃 GG    [584-42-9]
Alizarin yellow R 茜素黃R    [2243-76-7]
    
D-Biotin D-    [58-85-5]
D-Biotin D-    [58-85-5]
D-Allose D-阿洛糖    [2595-97-3]
Alizarin yellow R 茜素黃R    [2243-76-7]
Alizarin yellow R , sodium salt 茜素黃R鈉鹽    [1718-34-9]
Alkali blue 6B 堿藍(lán) 6B    [30586-13-1]
Alkali blue 6B, mono sodium salt 堿藍(lán)6B鈉鹽    [1324-80-7]
Alkaline phosphatase 堿性磷酸單脂酶    [9001-78-9]
Alkaline phosphatase, 50% Glycerol Solution 堿性磷酸單脂酶，50%甘油溶液    [9001-78-9]
Alkaline phosphatase, ammonium sulfate suspension 堿性磷酸單脂酶，硫酸銨懸浮液    [9001-78-9]
Alkaline phosphatase (AP), from Calf Intestine freeze-dried powder 堿性磷酸單脂酶    [9001-78-9]
Alkaline phosphatase, 50% glycerol solution 堿性磷酸單脂酶，50%甘油溶液    [9001-78-9]
Alkaline phosphatase ammonium sulfate suspension 堿性磷酸單脂酶，硫酸銨懸浮液    [9001-78-9]
Allantoin 尿囊素    [97-59-6]
Allantoin 尿囊素    [97-59-6]
Nigrosin B 油溶苯胺黑    [8005-02-5]
Ninhydrin 茚三酮    [485-47-2]
Nuclease Eliminator Wipes 去核酸酶擦拭布    /
1-Ally-2-thiourea 烯丙基硫脲    [109-57-9]
Aloe-emodin 蘆薈大黃素    [481-72-1]
Aluminum powder 鋁粉    [7429-90-5]
小鼠粘蛋白/粘液素7(MUC7)ELISA 試劑盒 
小鼠嗜酸性粒細(xì)胞陽(yáng)離子蛋白(ECP)ELISA 試劑盒 
小鼠Qa淋巴細(xì)胞抗原2(Qa-2)ELISA 試劑盒 
小鼠D-乳酸脫氫酶(D-LDH)ELISA 試劑盒 
小鼠孕酮受體(PROGR)ELISA 試劑盒 
小鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白6(IGFBP-6)ELISA 試劑盒 
小鼠肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子(PARC/CCL18)ELISA 試劑盒 
小鼠溶菌酶(LZM)ELISA 試劑盒 
小鼠β連環(huán)蛋白/聯(lián)蛋白(β-Cat)ELISA 試劑盒 
小鼠骨退化特異標(biāo)志物(CTX-2)ELISA 試劑盒 
小鼠垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽(PACAP)ELISA 試劑盒 
小鼠血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)ELISA 試劑盒 
小鼠血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA 試劑盒 
小鼠角化細(xì)胞內(nèi)分泌因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)ELISA 試劑盒 
小鼠活化素A(ACV-A)ELISA 試劑盒 
小鼠腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)ELISA 試劑盒 
小鼠骨成型蛋白2(BMP-2)ELISA 試劑盒 
小鼠骨成型蛋白4(BMP-4)ELISA 試劑盒 
小鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白6(IGFBP-6)ELISA 試劑盒 
小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白1δ(MIP-1δ/CCL15)ELISA 試劑盒 
小鼠肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子(PARC/CCL18)ELISA 試劑盒 
小鼠溶菌酶(LZM)ELISA 試劑盒 
小鼠可溶性CD30(sCD30)Elisa 試劑盒 
小鼠可溶性肌球蛋白重鏈2(sMHC-2)Elisa 試劑盒 
小鼠可溶性肌球蛋白重鏈1(sMHC-1)Elisa 試劑盒 
小鼠粘蛋白/粘液素5AC(MUC5AC) ELISA 試劑盒 
小鼠血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)ELISA 試劑盒
小鼠血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA 試劑盒
小鼠角化細(xì)胞內(nèi)分泌因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)ELISA 試劑盒
小鼠活化素A(ACV-A)ELISA 試劑盒
小鼠抗甲狀腺過(guò)氧化物酶抗體(TPO-Ab)ELISA 試劑盒 
小鼠腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)ELISA 試劑盒
小鼠凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)ELISA 試劑盒 
小鼠骨成型蛋白2(BMP-2)ELISA 試劑盒
小鼠骨成型蛋白4(BMP-4)ELISA 試劑盒
小鼠骨成型蛋白受體1A(BMPR-1A)ELISA 試劑盒
小鼠血管生成素4(ANG-4)ELISA 試劑盒 
小鼠骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)ELISA 試劑盒
小鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類(MHC-Ⅲ/H-2Ⅲ)ELISA 試劑盒
小鼠E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白(E-Cad)ELISA 試劑盒
小鼠CD30分子(CD30)ELISA 試劑盒