SH30396.03
[注意事項(xiàng)]
1. 血清解凍:將血清從冰凍區(qū)中取出后(切勿直接將血清從-20℃進(jìn)入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀),先置于2~8℃區(qū)域中使之融化,然后在室溫下使之全融。使用前再預(yù)溫到將使用的溫度(如37℃),但必須注意的是,解凍過程中應(yīng)輕輕地?fù)u晃均勻。
血清在解凍過程中可能會(huì)出現(xiàn)少量絮狀或片狀析出物,主要是血清中脂蛋白的變性或是纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)析出,但這些析出物,并不影響血清本身的質(zhì)量。 若一次無法用完一瓶,建議無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷凍。
2.血清熱滅活:一般以56℃、30分鐘水浴來處理已預(yù)溫至該溫度的血清。
因?yàn)榇思訜岵襟E,可以使補(bǔ)體去活性,而補(bǔ)體所參與的反應(yīng)有:溶細(xì)胞活性,平滑肌的收縮,肥大細(xì)胞和血小板組胺的釋放,增強(qiáng)吞噬作用,淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的趨化和激活。實(shí)驗(yàn)顯示,經(jīng)過正確處理的熱滅活血清,對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)過處理的血清對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn),或*沒有任何作用,甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量,而造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清,沉淀物的形成會(huì)顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點(diǎn)”,常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環(huán)境中,又會(huì)使此沉淀物更增多,使研究者認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。
因此我們建議若非必須,可以不需要做熱滅活這一步,以確保血清的質(zhì)量。
3.避免析出物和澄明度降低:建議在使用血清的時(shí)候,注意正確的血清解凍步驟,并盡量避免熱滅活血清及長(zhǎng)時(shí)間的將血清置于非凍結(jié)狀態(tài)。
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