人低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)ELISA Kit說明書

elisa 小知識(shí)：
辣根過氧化物酶(HRP)是一種糖蛋白，每個(gè)分子含有一個(gè)氯化血紅素(protonhemin)區(qū)作輔基。酶的濃度和純度常以輔基的含量表示。氯化血紅素輔基的zui大吸收峰是403nm，HRP酶蛋白的zui大吸收峰是275nm，所以酶的濃度和純度計(jì)算式是(已知HRP的A(1cm 403nm 1%)＝25，式中1％指HRP百分濃度為100ml含酶蛋白1g，即10mg/ml，所以，酶濃度以 mg/ml 計(jì)算是HRP的A(1cm 403nm mg/ml=2.5)HRP純度(RZ)=A403nm/A275nm純度RZ(Ｒeinheit Zahl)值越大說明酶內(nèi)所含雜質(zhì)越少。高純度HRP的RZ值在3.0左右，zui高可達(dá)3.4。用于ELISA檢測(cè)的HRP的RZ值要求在3.0以上。

人低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)ELISA Kit說明書

ELISA小常識(shí)：ELISA試驗(yàn)條件固相載體的選擇：載體的種類比較多，其中包括纖維素、交聯(lián)右旋糖酐、葡萄球菌聚苯乙烯、聚丙烯酰胺等。從使用形式上可有凹孔平板、試管、珠粒等。聚苯乙烯凹孔板是應(yīng)用zui廣泛的一種載體。聚苯乙烯塑料微量滴定板吸附蛋白的性能好，操作簡(jiǎn)便、用量小，適于大批檢查。由于聚苯乙烯的工藝過程不是很穩(wěn)定,造成各批次差異比較大。所以進(jìn)行ELISA之前，必須進(jìn)行篩選。檢查方法：⑴ 吸附性能的檢查：先加抗體包被，然后加入同一稀釋度的酶標(biāo)抗體，zui后加底物、顯色、測(cè)OD值,求出總平均OD值,再求出每相鄰兩孔的OD平均值,此均值在總均值的±10%以內(nèi)為合格,若中間孔與四周孔OD值相差太大，或一側(cè)與另一側(cè)孔OD值相差較大均屬不合格。⑵ 對(duì)比測(cè)定陽性血清與陰性血清，觀察是否存在明顯差異，若二者OD值相差于10倍以上者為合格。板的處理。新板一般不用處理,用蒸餾水沖洗即可應(yīng)用。板用一次即廢。但不少實(shí)驗(yàn)工作者認(rèn)為用超聲波處理，清潔液Tritonx100、20%乙二醇處理仍可應(yīng)用。但發(fā)現(xiàn)空白對(duì)照顯色較深和陽性樣品顯色結(jié)果不理想時(shí)，應(yīng)放棄不用。

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