蔗糖系列_細(xì)胞壁不溶性酸性轉(zhuǎn)化酶BAI測(cè)試盒
測(cè)定方法:微量法
產(chǎn)品規(guī)格:100管/48樣
注 意 :正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義:
蔗糖轉(zhuǎn)化酶(Invertase,Ivr)催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖,是高等植物蔗糖代謝關(guān)鍵酶之一。根據(jù)適 pH,Ivr分為酸性轉(zhuǎn)化酶(AI)和中性轉(zhuǎn)化酶(NI)兩種類型。
AI的適pH為3~5。AI分為可溶性AI(S-AI)和細(xì)胞壁不溶性AI(B-AI)兩種類型。B-AI存在于細(xì)胞間隙并結(jié)合在細(xì)胞壁上,主要參與韌皮部質(zhì)外體卸載時(shí)蔗糖的分解,以維持庫源之間蔗糖的濃度。
蔗糖系列_細(xì)胞壁不溶性酸性轉(zhuǎn)化酶BAI測(cè)試盒
測(cè)定原理:
B-AI催化蔗糖降解產(chǎn)生還原糖,進(jìn)一步與3,5-二硝基水楊酸反應(yīng),生成棕紅色氨基化合物,在510nm有特征光吸收,在一定范圍內(nèi)510nm光吸收增加速率與B-AI活性成正比。
自備用品:
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液1:液體100mL×1瓶,4℃保存;
提取液2:液體100mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體20mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1瓶,4℃保存;臨用前加入10mL試劑一充分溶解備用;用不完的試劑4℃保存;
試劑三:液體15mL×1瓶,4℃保存;
粗酶液提取:
按照組織質(zhì)量(g):提取液1體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液1),進(jìn)行冰浴勻漿。12000g 4℃離心10min,棄上清,沉淀中加入1mL蒸餾水,充分震蕩混勻,12000g 4℃離心10min,棄上清,沉淀中加入1mL提取液2 充分混勻,4℃浸提過夜,12000g 4℃離心20min,取上清置冰上待測(cè)。