蔗糖系列_蔗糖磷酸化酶(SP)測試盒_微量法
測定方法:微量法
產(chǎn)品規(guī)格:100管/96樣
注 意 :正式測定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義:
SP(EC2.4.1.7)主要存在于微生物和植物中,裂解葡萄糖苷鍵,催化葡萄糖基轉(zhuǎn)移到果糖、木糖、半乳糖和鼠李糖等,合成相應(yīng)的葡萄糖基低聚糖。此外,SP還能催化合成熊果苷,具有很好的美白效果,在化妝品工業(yè)中具有重要應(yīng)用。
蔗糖系列_蔗糖磷酸化酶(SP)測試盒_微量法
測定原理:
SP能夠以磷酸為受體,催化蔗糖產(chǎn)生1-磷酸葡萄糖,在葡萄糖磷酸變位酶催化下變位為6-磷酸葡萄糖,在6-磷酸葡萄糖脫氫酶作用下還原NADP+生成NADPH,導(dǎo)致340nm光吸收值增加。測定340nm吸光度增加速率,即可計(jì)算SP活性。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:
天平、低溫離心機(jī)、恒溫水浴鍋、酶標(biāo)儀、96孔板和蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體15mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:粉劑×1支,-20℃避光保存,臨用前加2.5mL蒸餾水溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
試劑三:粉劑×1支,-20℃避光保存,臨用前加5mL蒸餾水溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
粗酶液提?。?/p>
1. 組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進(jìn)行冰浴勻漿,然后10000g,4℃,離心10min,取上清待測。
2. 細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后10000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。