酯酶系列_乙酰酯酶(AchE)測(cè)試盒_微量法
測(cè)定方法：微量法
產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣
注 意 ：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
AchE屬于Ser水解酶，廣泛存在于各種動(dòng)物組織和血清中。AchE催化乙酰（Ach）水解，在神經(jīng)傳導(dǎo)調(diào)節(jié)中起重要作用。
酯酶系列_乙酰酯酶(AchE)測(cè)試盒_微量法
測(cè)定原理：
AchE催化Ach水解生成二硫?qū)ο趸郊姿幔―TNB）作用生成5-巰基-硝基苯甲酸（TNB）；TNB在412nm處有吸收峰，通過(guò)測(cè)定412 nm吸光度增加速率，計(jì)算AchE活性。
自備儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體×1瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×1支，4℃保存。臨用前加入1.3 mL試劑二，充分震蕩溶解。
試劑四：粉劑×1支，4℃保存。臨用前加入1.3 mL試劑二，充分震蕩溶解。
粗酶液提取：
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿，8000g 4℃離心10min，取上清液待測(cè)。
2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。
3. 血清等液體：直接測(cè)定。
測(cè)定操作：
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到412 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二置于37℃水浴中預(yù)熱30min。
3. 取微量石英比色皿/96孔板，依次加入20μL上清液、160 μL試劑二、10μL試劑三和10μL試劑四，迅速混勻，于412nm處測(cè)定3min內(nèi)吸光值變化，第10s吸光值記為A1，第190s吸光值記為A2?！鰽測(cè)定管=A2-A1。
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