糖代謝系列_還原糖含量測試盒
測定方法:微量法
產(chǎn)品規(guī)格:100管/48樣
注 意 :正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義:
還原糖廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中。植物體內(nèi)的還原糖主要包括葡萄糖、果糖和麥芽糖等,是常見的單糖和雙糖,其中葡萄糖和果糖不僅是呼吸作用的主要底物,也是進(jìn)一步合成蔗糖、淀粉和纖維素的底物。
測定原理:
加熱促進(jìn)堿性溶液中3,5-二硝基水楊酸溶液與還原糖生成棕紅色氨基化合物,在540nm有特征吸收峰;在一定的濃度范圍內(nèi),還原糖含量與540nm吸光度成線性關(guān)系,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,即可求出樣品中還原糖的量。
糖代謝系列_還原糖含量測試盒
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一:100mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:8mL×1瓶 ,4℃保存;
樣品中還原糖的提取:
1、細(xì)菌或細(xì)胞的處理:收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3S,間隔10S,重復(fù)30次),轉(zhuǎn)移到有蓋離心管中(防止加熱時(shí)水分散失),80℃水浴中40min并且振蕩8~10次,8000g,25℃離心10min,取上清供測定用。
2、組織的處理:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一),冰浴勻漿,轉(zhuǎn)移到有蓋離心管中(防止加熱時(shí)水分散失),80℃水浴中40min并且振蕩8~10次,8000g 吧,25℃離心10min,取上清供測定用。
3、血清(漿)的處理:按照血清(漿)體積(mL):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議取0.1mL血清(漿)加入1mL試劑一),冰浴勻漿,轉(zhuǎn)移到有蓋離心管中(防止加熱時(shí)水分散失),80℃水浴中40min并且振蕩8~10次,8000g,25℃離心10min,取上清供測定用。