4香豆酸輔-酶A連接酶4CL測(cè)試盒_花青素合成
測(cè)定方法：分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格：50管/24樣
注 意：正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
4CL 是連接苯丙酸途徑與木質(zhì)素特異合成途徑的關(guān)鍵酶，主要催化肉桂酸生成相應(yīng)的肉桂酸輔酶 A 酯，是合成木質(zhì)素與其他苯丙烷類化合物的代謝流向調(diào)控點(diǎn)。該酶主要存在于高等植物、酵母和菌類中，研究該酶可以探討多種生物細(xì)胞發(fā)育過程中木質(zhì)素沉積的代謝機(jī)理，為減少水果石細(xì)胞含量而提高其品質(zhì)提供依據(jù)。
4香豆酸輔-酶A連接酶4CL測(cè)試盒_花青素合成
測(cè)定原理：
4CL 催化 4-香豆酸和 CoA 生成 4-香豆酸 CoA，在 333nm 下測(cè) 4-香豆酸 CoA 生成速率，即可反映 4CL 活性。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
提取液：60mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體 60 mL×1 瓶， 4℃保存；
試劑二：粉劑×2 瓶，-20℃保存；
粗酶液提取：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。
測(cè)定步驟：
1、 分光光度計(jì) 40℃預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 333nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 樣本測(cè)定
（1）在試劑二中加入 12.5mL 試劑一充分溶解混勻，置于 40℃水浴預(yù)熱 10min；現(xiàn)配現(xiàn)用
（配好后 24h 內(nèi)用完）；
（2） 測(cè)定管：在 1mL 石英比色皿中加入 50μL 樣本和 950μL 試劑二，混勻，立即記錄
333nm 處 40℃反應(yīng) 30min 后的吸光值 A2。
環(huán)保在線