氨基酸代謝系列_谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT/AST)測試盒
測定方法:微量法
產(chǎn)品規(guī)格:100管/48樣
注 意:正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
GOT( 2.6.1.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,催化可逆轉(zhuǎn)氨基反應,是氨基酸代謝的重要酶。此外,GOT在心肌細胞中含量,臨床上一般常作為心肌梗塞和心肌炎的輔助檢查。肝臟損害時其血清濃度也可升高。
氨基酸代謝系列_谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT/AST)測試盒
測定原理:
GOT催化 α-同戊二酸和天門冬-氨酸發(fā)生轉(zhuǎn)氨基反應,生成谷-氨酸和草酰乙酸,草酰乙酸進一步自行脫羧生成丙酮酸;丙酮酸可與2,4-二硝-基苯肼反應生成2,4-二硝-基苯腙,在堿性條件下顯棕紅色;測定505nm吸光度的變化,即可計算GOT酶活力。
需自備的儀器和用品:
可見分光光計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:液體60mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體2.5 mL×1瓶, 4℃保存;
試劑二:液體2.5 mL×1瓶, 4℃保存;
試劑三:液體25 mL×1瓶,4℃保存;
樣品測定的準備:
1、細菌、細胞或組織樣品的制備:
細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、血清(漿)樣品:直接檢測。