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酶聯(lián)免疫分析法

閱讀:244發(fā)布時間:2014-12-22

酶聯(lián)免疫法的全稱是酶聯(lián)免疫吸附劑測定法(即ELISA)它是應(yīng)用固相載體作為免疫吸附劑,以便于分離結(jié)合的與游離的酶標記物。臨床上檢測抗原常用雙抗夾心型ELISA檢測抗體常用間接型ELISA。

雙抗夾心法和間接法的詳細介紹如下:

一、雙抗夾心法
雙抗夾心法的基本原理是將抗體包被載體后作為固相,加入待測標本,使其中的相應(yīng)抗原通過免疫學(xué)反應(yīng)結(jié)合到固相抗體上,洗滌除去未結(jié)合的抗原;再加入酶結(jié)合物與已結(jié)合在固相抗體上的抗原反應(yīng),并洗滌除去未結(jié)合的游離酶結(jié)合物。zui后加入酶的相應(yīng)底物,固相化的酶催化底物反應(yīng)生成有色產(chǎn)物。在一定溫度下作用一定時間后終止反應(yīng),顯色產(chǎn)物的量與結(jié)合在固相上的抗原量有關(guān)。用此法檢測的抗原,要求至少有二個結(jié)合位點,故不能用來檢測半抗原物質(zhì)。整個個測定過程需要三次溫育和洗滌步驟,對每—待測抗原都要制備特異性的酶結(jié)合物。目的臨床上多用于檢測HBsAg、AFP和IgG等。
二、間接法
檢測體液中的抗體成分常用間接法。先用抗原包被固相,載體加入含待測抗體的體液標本,溫育后洗滌;再加入酶,標記的抗人IgG結(jié)合物,使之與結(jié)合在固相抗原上的人,IgG反應(yīng),溫育后洗去游離的酶結(jié)合物。用酶相應(yīng)的底物反應(yīng)來測定酶活性,酶活性和待測標本中與固相抗原結(jié)合的抗體量有關(guān)。
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