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生物實(shí)驗(yàn)中培養(yǎng)細(xì)胞常用的固定劑和固定方法

閱讀：516發(fā)布時(shí)間：2015-3-23

生物實(shí)驗(yàn)中培養(yǎng)細(xì)胞的步驟至關(guān)重要，江蘇晶美生物科技的研究人員通過(guò)每次的實(shí)驗(yàn)總結(jié)出培養(yǎng)細(xì)胞常用的固定劑和固定方法。常用的培養(yǎng)細(xì)胞常用固定劑有4％多聚甲醛磷酸緩沖液、丙酮、甲醇和95％乙醇。在固定之前需用37℃預(yù)熱的PBS輕洗細(xì)胞。

1．4％多聚甲醛磷酸緩沖液固定10―20分鐘，干燥。

2．甲醇 10‰甲醇固定5―20分鐘，自然干燥。

3．丙酮 4℃冷丙酮固定組織穿透性和脫水性強(qiáng)，抗原保存好，很少用于組織切片，常用于培養(yǎng)細(xì)胞和細(xì)胞涂片的固定，平時(shí)丙酮4℃低溫保存?zhèn)溆?，臨用時(shí)，將載玻片插入冷丙酮內(nèi)5～10分鐘，取出后自然于燥。

4．乙醇 95％乙醇脫水性強(qiáng)，易引起組織收縮、變硬，影響切片質(zhì)量，因而固定時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)(2小時(shí)內(nèi))。乙醇使蛋白變性程度輕，固定后蛋白可再溶解，在染色中孵育時(shí)間長(zhǎng)的情況下，抗原可流失，并減弱反應(yīng)強(qiáng)度。

5．乙醚(或三氯甲烷) 與乙醇等量混合對(duì)組織穿透性*，即使涂片上含較多的黏液，固定效果仍較好，是理想的細(xì)胞固定液。

培養(yǎng)細(xì)胞固定之后晾干可使細(xì)胞牢固地黏附在載玻片上，故對(duì)于容易脫落的細(xì)胞應(yīng)延長(zhǎng)晾干時(shí)間。晾干之后PBS漂洗3次，然后進(jìn)行組織化學(xué)或免疫組織化學(xué)染色。

用于免疫組織化學(xué)的固定劑種類(lèi)很多，不同的抗原和標(biāo)本均可醛類(lèi)固定液，如效果不佳，再試用其他固定液。選擇*固定液的標(biāo)準(zhǔn)：一是能地保持組織細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)；二是zui大限度地保存抗原免疫活性和被檢物不被丟失。一些含重金屬固定液可用于組織化學(xué)標(biāo)本的固定，但在免疫組織化學(xué)染色中禁用。

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