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小鼠*Ⅷ相關(guān)抗原(FⅧ-Ag)elisa試劑盒標(biāo)本的保存方法:
血清標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測(cè).如有細(xì)菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性反應(yīng).如在冰箱中保存過(guò)久,其中的可發(fā)生聚合,在間接法ELISA中可使本底加深.一般說(shuō)來(lái),在5天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可放置于4℃,超過(guò)一周測(cè)定的需低溫冰存.凍結(jié)血清融解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下顛倒混和,不要在混勻器上強(qiáng)烈振蕩.混濁或有沉淀的血清標(biāo)本應(yīng)先離心或過(guò)濾,澄清后再檢測(cè).反復(fù)凍融會(huì)使抗體效價(jià)跌落,所以測(cè)抗體的血清標(biāo)本如需保存作多次檢測(cè),宜少量分裝冰存.保存血清自采集時(shí)就應(yīng)注意無(wú)菌操作,也可加入適當(dāng)防腐劑.
“小鼠*Ⅷ相關(guān)抗原(FⅧ-Ag)elisa試劑盒"間接法步驟:
1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過(guò)夜;
2.次日洗滌3次;
3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌;
4.(同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照)于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml;
5.37℃孵育35-60分鐘,洗滌;
6.zui后一遍用DDW洗滌。
7.加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
8.終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
9.結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽(yáng)性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+"、“-"號(hào)表示。也可測(cè)OD值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽(yáng)性。
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