ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的因相化及抗原或抗體的朗際記。結(jié)合在固相裁體表面的抗原或抗體仍保持共免疫學(xué)活性；陳標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酪的活性。在測定時(shí)，恢受撿標(biāo)本(測定拈小約坑體或抗原)與田棚戴體表而的抗原或抗體起反應(yīng)。用沉滌的方法位舊相裁郎上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體小的其他物質(zhì)分開。再加入彌標(biāo)記的抗原或枕體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在團(tuán)相赦體—l：。此時(shí)團(tuán)相—L肋沸置路標(biāo)本小受撿物質(zhì)的且至一定的比例。加入陳反應(yīng)的底物后，底物被陀他化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的顯i；標(biāo)本小受撿物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)至色的深混進(jìn)行定性或定旦分橋。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)酌結(jié)果，使測定方法達(dá)到很高的放感度。 ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。在這種測定方法令有三個(gè)必要的試劑：(1)因相的抗原或抗體，即“免疫吸附劑"(舊mun080rben L)；(2)酶標(biāo)記的航原或改體，稱為“結(jié)合物"(co刨ugate)；(3)酶反應(yīng)的底物。根據(jù)試劑的來源和標(biāo)本的情況以及檢測的具體條仍：，可設(shè)計(jì)出各種不同類型的檢測方法。用于臨床檢驗(yàn)的E量SA主要有以下幾種類型。
1 雙抗體夾心法測
2 間接法測抗體
3 雙抗原夾心法城抗體
4 競爭法測抗體
5 競爭法甜抗原
6 捕獲包被法測IgM抗體
7 ABG—ELISA法
的試劑，良打的儀器和正確的操作是保證ELl8入檢測糾果準(zhǔn)確可靠泊必要條件。BLISA的換作因網(wǎng)相路體的形式不問而有歷第異，因內(nèi)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)一般均用根式 ELIS入。本文將叔述極式BLl日A各個(gè)操作步驟的注意要點(diǎn)，珠式、管式及磁性微球ELISA，國外試劑均與輸殊儀器配合府用，兩者均右詳削的使用說明，嚴(yán)格遵照規(guī)定扮作,必能得次腔確的納果。ELISA試劑的評(píng)價(jià)(evaIuaLlon)分兩個(gè)方面：一是試劑本身的質(zhì)量評(píng)價(jià)，符合一定要求后4‘能生產(chǎn)供應(yīng)，一是在臨床應(yīng)用中效果的評(píng)價(jià)。以肝炎EUSA診斷試劑為例，首先必須通過中國藥勵(lì)生物制品檢定所的檢定，以得到生產(chǎn)酌許可。檢定內(nèi)容除包裝、標(biāo)簽、Lx明書等外，對(duì)試荊的性能，如特異性、靈敏度、精密度和線性等均路逐項(xiàng)檢定，通過對(duì)一系列參比品酌檢測，結(jié)果符合要求卉劉‘為合格。ELISA試劑的臨床質(zhì)量評(píng)價(jià)是用法試劑對(duì)臨床樣本進(jìn)行檢測，以觀察共實(shí)際應(yīng)用價(jià)情。部臨槍，P心對(duì)乙肝BUSA診斷試劑在這方而進(jìn)行了工作，通過質(zhì)量評(píng)價(jià)，促進(jìn)了試劑質(zhì)量的提高?？乖悄茉跈C(jī)體由引起特異性免疫應(yīng)答的物質(zhì)?？乖M(jìn)入機(jī)體后，可刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體和引起細(xì)胞免疫。在免疫測定中，抗原是指能與抗體結(jié)合的物質(zhì)。能在機(jī)體中引起抗體產(chǎn)生的抗原多為分子量大于5000的蛋白質(zhì)，例如乙型肝炎病毒表面抗原(HB8Ag)、P胎蛋白(AFP)等。小分子化合物在與大分子蛋白質(zhì)結(jié)合后能引起機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體的，稱為半抗原(hapten)，例如某些激素、藥物等?？乖姆磻?yīng)性取決于抗原決定族(anti8enic dete2minan L)，或稱為表位[epitope)。一個(gè)抗原分子可帶有不同的決定按，例如HB8Ag小可帶有a、d、ylw、r等決定簇?？乖贵w的結(jié)合實(shí)質(zhì)—k只發(fā)生在抗原的抗原決定族與抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)之間。由于兩者在化學(xué)結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)型上是互補(bǔ)關(guān)系，所以抗原抗體反應(yīng)具有尚度的特異性。例如乙肝病森小的表面抗原(HB9Ag)、e拉原(HBeAg)和核心拉原〔HBcA8)，雖來源于同一病毒，僅僅與其相應(yīng)的抗體結(jié)合，而不與另外兩種抗體反應(yīng)?？乖贵w反應(yīng)的這種特異性使免疫測定能在一非常復(fù)雜的蛋白質(zhì)化合物(例如血清)由測定某一特定的物質(zhì)，而不需先分離待檢物。
會(huì)員1.png)