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南京科捷檢測科技發(fā)展有限公司
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閱讀：1317發(fā)布時(shí)間：2017-6-22
酵母葡聚糖是酵母細(xì)胞壁的主要成分，存在于酵母細(xì)胞壁的內(nèi)層，占酵母細(xì)胞壁干質(zhì)量的26%~30%。1973年，Manners等發(fā)現(xiàn)酵母細(xì)胞壁中存在兩種不同的葡聚糖：含有3%β-1,6-D糖苷鍵的β-1,3-D-葡聚糖和含有β-1,3-D糖苷鍵的β-1,6-D-葡聚糖，其中前者占總葡聚糖的85%。
研究證明酵母葡聚糖具有抗病毒、抗腫瘤、抗輻射等功能，引起人們廣泛關(guān)注。酵母葡聚糖由于是不溶性多糖，并與甘露聚糖、蛋白質(zhì)等物質(zhì)相互結(jié)合，所以其定量測定一直是研究中的難題。酵母葡聚糖的測定方法多采用*-硫酸法測定，但是此方法靈敏度較低，不能準(zhǔn)確分析出其中含有的甘露聚糖、幾丁質(zhì)等其他多糖，對(duì)測定結(jié)果造成一定誤差。
實(shí)驗(yàn)采用高壓水解－HPLC法測定酵母葡聚糖中葡聚糖含量，方法簡單、快速，測定結(jié)果準(zhǔn)確。
儀器設(shè)備：
LC-600B智能全控液相色譜系統(tǒng)由1臺(tái)P600B高壓恒流泵、1臺(tái)UV600B紫外檢測器與1臺(tái)SCL600B系統(tǒng)控制器直接構(gòu)成梯度分析系統(tǒng)。*采用柱塞浮動(dòng)式安裝方式，增強(qiáng)儀器性能的穩(wěn)定性和使用的持久性。廣泛應(yīng)用于研究開發(fā)、醫(yī)藥檢驗(yàn)、食品檢測、化工分析、監(jiān)測等眾多分析領(lǐng)域。
實(shí)驗(yàn)方法步驟
（1）樣品處理
精密稱取0.4000g葡聚糖樣品(或凝膠多糖)于50mL刻度試管中，準(zhǔn)確加入一定量鹽酸，將試管置于微型旋渦混合儀上混合均勻。待樣品*均勻后，將試管置于30℃水浴鍋45min，每隔15min振搖一次。然后將樣品溶液全部轉(zhuǎn)入250mL杜氏瓶中，用純水定容至150mL，于121℃高壓滅菌鍋中水解一定時(shí)間。
將水解后的樣品取出，立即冷卻至室溫，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至6～7。將調(diào)節(jié)pH后的溶液轉(zhuǎn)入200mL容量瓶并定容，用中速定性濾紙過濾后，取濾液用0.45μm濾膜過濾，液相色譜測定其中葡萄糖含量。
（2）葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液
準(zhǔn)確稱取0.5000g*，用純水溶解并定容至100mL，搖勻得到濃度為5000μg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，然后分別取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、10mL上述溶液于25mL容量瓶中，用純水定容，搖勻得到濃度分別為200、400、600、800、1000、2000μg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液，用0.45μm濾膜過濾，液相色譜測定其中葡萄糖含量。
色譜分析條件
色譜柱 | Sugar-pakTM 1,6.5mm×300mm |
流動(dòng)相 | 高純水 |
流速 | 0.5mL/min |
柱溫 | 80℃ |
進(jìn)樣量 | 20μL |
色譜圖分析
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