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談談液相色譜系統(tǒng)的維護與保養(yǎng)

閱讀:4633發(fā)布時間:2018-5-31

一、液相色譜流動相
保持貯液瓶清潔,定期清洗或更換;盡量使用HPLC級溶劑和試劑;含有緩沖鹽和非HPLC級的流動相一定要過濾;含有緩沖鹽的流動相應現用現配,防止微生物生長和組分改變。

1、更換流動相注意事項:
液相色譜常用的流動相包括多種有機溶劑、水、各種緩沖溶液等,它們之間存在互溶性的問題,同時也存在緩沖溶液鹽析出的問題。

2、更換互溶性流動相將新流動相置于儲液瓶中:
a. 打開放空閥,啟動泵使新的流動相從放空閥出口流出20mL左右。
b. 關閉放空閥,然后將進樣閥與色譜柱相連接端卸開,用小容器放置于進樣閥的出口處。
c. 啟動恒流泵,讓流動相從進樣閥出口流出10mL左右。
d. 重新連接色譜柱,設定適當流速,當流動相流出約30倍于色譜柱體積,并且檢測器基線平衡后,流動相更換完畢。

3、更換非互溶性流動相:
a. 用中介溶劑更換泵中的舊流動相(不要接色譜柱)。
b. 如果色譜柱中流動相也需要更換,用該溶劑沖洗色譜柱。
c. 用新流動相更換中介溶劑。

4、更換緩沖液流動相:
a. 用5%~20%甲醇水更換色譜系統(tǒng)中緩沖液(包括色譜柱) 。(非常重要)
b. 用新流動相更換過渡溶劑。
c. 由于一般緩沖液遇到甲醇、異丙醇等高含量有機溶劑混合液時容易將緩沖液中的鹽結晶出來,而結晶鹽對密封圈、柱塞桿以及進樣閥內部轉子和定子都有很大的損壞,也容易阻塞*,因此要特別仔細操作。
d. 用緩沖液作流動相或一段時間不使用泵,照以上步驟更換溶劑,然后用純甲醇或乙腈沖洗。

 

二. 泵頭

泵的密封圈是泵zui容易磨損的部件

1、泵的密封圈的維護保養(yǎng):
每天要把泵中的緩沖液沖洗干凈,防止鹽沉積;用HPLC級試劑;用燒結不銹鋼吸液過濾頭;

2、進樣閥
zui易磨損:轉子密封

3、保養(yǎng)事項:
a、樣品進樣前要過濾;
b、停機后要用溶劑沖洗干凈進樣器內殘留樣品和緩沖鹽;
c、不要用氣相色譜用的尖頭針進樣。

4.  檢測器
保持檢測器清潔,每天與色譜柱一同清洗;
用脫過氣的流動相,防止空氣卡在檢測池內;
檢測器燈有一定壽命,不用時不要打開燈。但也不能
夠經常開關燈。


三、液相系統(tǒng)常見故障排除方法
1、泵易出現的問題:
泵流速變小、柱壓低或不吸液流量不穩(wěn)或壓力不穩(wěn)漏液壓力顯示過高;泵流速變小、柱壓低的原因泵內有氣泡;溶劑過濾器阻塞;入口單向閥過濾片阻塞;泵中兩種溶劑不互溶;柱塞密封泄漏;連接管路泄漏。流量不穩(wěn)或壓力不穩(wěn)的原因泵頭內聚集了氣泡;泵中溶劑分層;泵頭失靈;入口單向閥污染;*漏液或部分堵塞。

2、漏液的原因
流動相從主副泵頭清洗管流出:由于密封圈內環(huán)表面和柱塞桿表面粘有異物;流動相從泵頭和定位套間漏液:密封圈外環(huán)密封不好;連接問題。

3、泵壓力顯示過高的原因
在線過濾器堵塞;進樣閥堵塞;色譜柱本身壓力增高;紫外檢測器入口管路堵塞。

4、泵中氣泡的排除
初次、長時間沒有使用、流動相脫氣效果不好等情況下系統(tǒng)內會出現氣體,導致壓力不穩(wěn)、流速不穩(wěn)甚至不能輸液等問題。輸液管中的氣泡可通過用泵的沖洗功能或者用注射器在放空閥排出;如果輸液管中無氣泡,流路中仍然無液體流出,可能是閥球閥座粘連,取出單向閥,向單向閥兩端分別吹氣,一通一堵為正常,兩端均堵說明閥球閥座粘連,需清洗閥球閥座。

5、在線過濾器及濾頭的清洗
將在線過濾器和濾頭拆下,浸入20-30%硝酸溶液中,超聲30分鐘,取出用水洗凈既可。如果使用的是正相系統(tǒng),注意將在線過濾器烘干后使用。

6、對柱塞桿的清洗
注意經常用蒸餾水沖洗柱塞桿后部的管路,避免鹽結晶在上面,從而損傷密封圈和柱塞桿,導致泵體漏液。

7、單向閥清洗
取下密封墊,將閥球、閥座、限位套倒入盛乙醇的小燒杯中在*清洗閥組件(用放大鏡觀察清洗后的閥球、閥座,如果有損壞,請換新的閥球、閥座);清洗后將閥件按要求裝入閥體(注意每組閥座的方向),在上面壓住密封墊圈。每組閥球、閥座不能互換,否則影響密封性能。閥組裝好后,可用吹氣的方法檢查安裝的是否正確。從標記環(huán)一端吹氣,空氣可以通過閥體,而在另一端吹氣,空氣應無法通過閥體。

8 、檢測時易出現的問題
a. 基線噪聲
b. 基線漂移
c. 工作站出現大的尖峰
d. 負峰
e. 工作站信號階梯式上升
f. 隨泵運動出現噪聲
g. 峰高或者峰面積重復性差
h. 分析準確度差

9、基線噪音
樣品或檢測池污染;樣品或參比池中有氣泡;記錄儀或裝置接地不良;檢測器光源故障;連接件泄露;很小的氣泡通過檢測池;由泵的脈動引起的規(guī)則脈沖;有微粒通過檢測池;進樣閥樣品環(huán)部分堵塞;氘燈壽命到限。

10、基線漂移
檢測池污染;檢測池內小氣泡;柱污染或固定相流失;檢測器溫度變化;檢測器光源故障;原先的流動相未*置換;溶劑儲瓶污染;強吸附的組分從色譜柱中洗脫下來;微粒造成進樣閥柱頭部分堵塞;溶劑分層。出現很大的尖峰檢測池內有氣泡通過-溶劑脫氣并*沖洗系統(tǒng);檢查連接系統(tǒng)是否漏液;記錄儀或檢測器接地不良-消除噪聲來源;確保良好接地;樣品溶解不*-更換樣品溶劑。

四、負峰
檢測器輸出信號的極性相反;樣品的吸收小于流動相,流動相不純;樣品溶劑干擾;示差折光檢測器中樣品的折射率較低;進樣中帶入氣泡。

1、信號階梯式上升
檢測器的輸出范圍設定不當-重新設定檢測器的輸出范圍。記錄儀或檢測器接地不良-確保良好接地。吸收過大,平頭峰-稀釋樣品。

2、基線隨著泵的往復出現噪音,儀器處于強空氣中或流動相脈動,改變儀器放置位置,放在合適的環(huán)境中。用一調節(jié)閥或阻尼器以減少泵的脈動。

3、峰高或峰面積重復性差
進樣體積不重復-保證*充滿定量管;檢測器響應不正常;記錄儀或工作站不正常;柱或檢測器被樣品超載;校準液或樣品溶液或內標物分解;保留時間不重復;溶質與固定相作用;色譜柱填充不良。

4、 分析的準確度差
校準不適當;校準液或樣品溶液或內標物分解;對內標物或欲測組分有未知干擾;溶質與固定相作用。

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