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南京科捷檢測(cè)科技發(fā)展有限公司
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閱讀：778發(fā)布時(shí)間：2020-7-28
金銀花為名貴中藥材之一，具有清熱解毒，疏散風(fēng)熱等功效，自古以來(lái)，就被民間廣泛使用。金銀花葉作為金銀花藥材的一種副產(chǎn)物，產(chǎn)量較大，但長(zhǎng)期以來(lái)都作為非藥用部分而未得到利用。研究表明，金銀花和金銀花葉中都含有一定量的黃酮，這些黃酮類物質(zhì)具有抗炎、抗高血壓、抗癌等藥理作用，是金銀花及葉中的主要活性成分之一。目前黃酮類化合物的測(cè)定方法有紫外分光光度法、鋁鹽顯色分光光度法、梯度洗脫反相高效液相色譜法等，而且主要以分光光度法為主測(cè)定總黃酮的含量。應(yīng)用高效液相色譜法測(cè)定的還較少。本實(shí)驗(yàn)采用反相高效液相色譜法，直接對(duì)金銀花及葉中的黃酮類物質(zhì)槲皮素和木犀草素進(jìn)行分離與測(cè)定，方法簡(jiǎn)便快速，結(jié)果可靠，為金銀花及葉中黃酮類物質(zhì)的研究提供了參考。
儀器準(zhǔn)備
儀器簡(jiǎn)介
LC-600A智能全控液相色譜系統(tǒng)由P600高壓恒流泵與UV600紫外檢測(cè)器直接構(gòu)成等度分析系統(tǒng)。使用WS600工作站可以同時(shí)控制數(shù)臺(tái)P600高壓恒流泵、UV600紫外檢測(cè)器及恒溫柱箱等，實(shí)行多元高壓洗脫、波長(zhǎng)掃描等功能。
應(yīng)用領(lǐng)域
化合物檢測(cè)、法醫(yī)毒物分析、蛋白質(zhì)組學(xué)食品檢測(cè)、藥物分析、環(huán)境分析、聚合物分析
供試品溶液制備：
分別稱取5g經(jīng)過(guò)干燥粉碎的金銀花和金銀花葉各一份，用100ml甲醇在40℃超聲提取30min，過(guò)濾，減壓濃縮，濃縮液用石油醚除雜，然后用甲醇定容至25ml容量瓶，即得到金銀花和金銀花葉的供試品溶液。
色譜條件：
色譜柱 | Zorbax 80A，Extend c18柱（4.6mm×250mm×5μm） |
流動(dòng)相 | 甲醇：0.02%磷酸（50:50） |
流速 | 1.0mL/min |
檢測(cè)波長(zhǎng) | 350nm |
柱溫 | 30℃ |
進(jìn)樣量 | 10μL |
測(cè)定結(jié)果：
分別對(duì)槲皮素和木犀草素的對(duì)照品溶液在200-900nm進(jìn)行紫外掃描，二者的**大和次大吸收峰分別在350nm和255nm，由于在350nm吸收**強(qiáng)，且干擾較少，故選用350nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。在實(shí)驗(yàn)時(shí)，用甲醇超聲提取金銀花和金銀花葉中的黃酮類化合物，然后過(guò)濾，減壓濃縮，濃縮液用石油醚除雜后定容檢測(cè)，這樣得到的色譜峰形好，雜質(zhì)峰較少，比直接將濃縮液定容檢測(cè)效果要理想。
本研究表明，采用反相高效液相色譜法直接對(duì)金銀花及葉中的黃酮類物質(zhì)槲皮素和木犀草素進(jìn)行分離與測(cè)定，此方法簡(jiǎn)便快捷，結(jié)果可靠。
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