超微量 Na +K+–ATP 酶測試盒的測定意義

時(shí)間：2023/11/23閱讀：183

（測組織、培養(yǎng)細(xì)胞）

二、樣本的前處理：

1、組織的前處理：（組織勻漿上清液的制備參考實(shí)驗(yàn)方法學(xué)）

準(zhǔn)確稱取組織重量，按重量（g）：體積(mL)=1:9 的比例，加入 9 倍體積的生理鹽水，冰水浴條件下機(jī)械勻漿，2500 轉(zhuǎn)/分，離心 10 分鐘，取上清液（即 10%的勻

漿上清液），再用生理鹽水 10 倍稀釋成 1%，同時(shí)用考馬斯亮藍(lán)試劑測定組織蛋白（試劑本所有售）。如果預(yù)試結(jié)果太高，再將 1%的組織勻漿稀釋成不同濃度再進(jìn)行預(yù)試后再?zèng)Q定取樣濃度。

2、培養(yǎng)細(xì)胞的前處理：將培養(yǎng)細(xì)胞消化，離心，棄上清，留下層細(xì)胞，每管加 0.2～0.3mL 生理鹽水或勻漿介質(zhì)制備成 10 7 /cm3 細(xì)胞懸液，即 10 7 /mL，再進(jìn)行破碎。破碎細(xì)胞的方法有三種：①、用勻漿器勻漿。②、用超聲粉碎器粉碎。③、反復(fù)凍溶 3 次（第③種方法有時(shí)會(huì)影響酶活力）。制備好的細(xì)胞懸液不需要離心，同時(shí)用考馬斯亮蘭試劑測定組織蛋白（試劑本所有售）。再將細(xì)胞勻漿液稀釋成不同濃度進(jìn)行預(yù)試，根據(jù)預(yù)試結(jié)果決定取樣濃度。

[注 1]：在測試加樣前要搖勻后取樣。

[注 2]：不可用磷酸鹽緩沖液或含磷的試劑作為樣本勻漿或稀釋樣本。

[注 3]：預(yù)試結(jié)果將絕對吸光度值（A 測定—A 對照）控制在 0.2 左右為宜。

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