ELISA是一種廣泛應(yīng)用在測定液體樣本中的蛋白、抗體、或激素的免疫分析技術(shù)。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)程序，通常是把蛋白、抗體、或激素等(即抗原)直接或是以捕捉抗體固定在固相載體上，再加入一級檢測抗體，形成一個抗原抗體的復(fù)合物。如果該抗體已經(jīng)用酶標(biāo)記了，即可用來直接測定抗原的量，若無，則可利用另一個酶標(biāo)記的二級抗體來測定抗原的量。測定抗原量的方法是加入該酶的底質(zhì)，作用后產(chǎn)生出現(xiàn)的顏色深淺和樣本中的抗原量呈正比的關(guān)系，依此原理計(jì)算出樣本中的抗原總量或濃度。以下是ELISA實(shí)驗(yàn)四種常用的方法優(yōu)點(diǎn)與缺點(diǎn)分析比較：
1、直接法
優(yōu)點(diǎn)：操作簡單快捷，步驟少，實(shí)驗(yàn)周期更短，避免了交叉反應(yīng)，測定結(jié)果不容易出錯
缺點(diǎn)：酶標(biāo)記抗體成本高，不是所有抗體都適用
2、間接法
優(yōu)點(diǎn)：高靈敏度，更經(jīng)濟(jì)，更靈活，利用了酶標(biāo)二抗，信號得到放大
缺點(diǎn)：可能存在交叉反應(yīng)，實(shí)驗(yàn)周期較長
3、雙抗體夾心法
優(yōu)點(diǎn)：高特異性和高靈敏度，能夠與復(fù)雜的樣品基質(zhì)兼容，一步法和二步法各有特點(diǎn)，一步法操作簡便但易出現(xiàn)非特異性干擾，二步法可以減少非特異性干擾，提高實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性
缺點(diǎn)：實(shí)驗(yàn)流程較長，需要使用酶標(biāo)抗體和固相載體，成本較高
4、競爭法
優(yōu)點(diǎn)：適用于小分子抗原，數(shù)據(jù)再現(xiàn)性高
缺點(diǎn)：整體的敏感性和特異性都較差，需要對樣本進(jìn)行稀釋.
