自Nakane(1966)建立了免疫酶標(biāo)記技術(shù)以來(lái)，這門技術(shù)得到了迅速的發(fā)展。DAKO EPOS的多聚螯合物免疫組化一步染色法，是一種即用型快速而有效的方法，具有更為簡(jiǎn)便、更為敏感和高特異性的特點(diǎn)。

1.、材料和方法

(1)材料

均為本院日?；顧z組織共32例，其中肉瘤5例，淋巴瘤7例，上皮癌12例，膠質(zhì)瘤8例。用10%甲醛固定，常規(guī)脫水、包埋、切片。

(2 )試劑

EPOS-Vimentin、LCA、Cytokeratin、S-100和一抗Vimentin、LCA、Cytokeratin、S-100以及LSABKit(K681)均由DAKO公司生物試劑，廣州基因公司提供。

(3 )方法

LSAB法(略)。

DAKOEPOS法：切片常規(guī)脫蠟至水;3%過(guò)氧化氫室溫孵育5min;pbs緩沖液洗3次，每次5min;用DAKO EPOS/Horseradish Peroxidase(HRP)室溫孵育30～60min;PBS緩沖液洗3次，每次5min;DAB顯色，水洗;蘇木素復(fù)染、脫水、封片。

2、結(jié)果

DAKO EPOS一步法染色結(jié)果陽(yáng)性物質(zhì)呈棕黃色，LCA定位于細(xì)胞膜，Vimentin、Cytokeratin、及S?100定位于細(xì)胞漿，蘇木素復(fù)染細(xì)胞核呈藍(lán)色，背景清晰，非特異性染色少，EPOS法與LSAB法比較，不但簡(jiǎn)化了操作步驟，而且大大縮短了染色時(shí)間，具有更佳的對(duì)比度，結(jié)果比較如表1所示。

3、討論

DAKO EPOS一步染色法是將特異性抗體和酶標(biāo)分子結(jié)合于柔韌的多聚螯合物，使特異性抗體和檢測(cè)系統(tǒng)結(jié)合為一種試劑，具有高靈敏性、高特異性、省時(shí)、減少處理步驟、重復(fù)性好、即用、低背景染色的優(yōu)點(diǎn)。

(1)省時(shí)

傳統(tǒng)的PAP、ABC或LSAB法整個(gè)染色程序時(shí)間在2～3h之間，而DAKOEPOS一步法染色時(shí)間只需40min，大大地節(jié)約了時(shí)間，而且省去了很多繁瑣的步驟。值得一提的是，利用DAKOEPOS一步法加上微波快速處理，整個(gè)染色制片過(guò)程僅用10min即可，特別適合于冰凍切片急診手術(shù)的鑒別診斷，只需Cytokeratin、LCA、S-100、Vimentin幾種抗體，就可以區(qū)分該腫瘤是來(lái)源于上皮、淋巴、神經(jīng)或間葉組織的腫瘤，為手術(shù)的進(jìn)一步進(jìn)行和及時(shí)用藥治療提供了更為可靠的依據(jù)。

(2 )低背景

從表1中可以發(fā)現(xiàn)，DAKO EPOS法染色的背景比LSAB法要低，其原因是前者只要一步即可，HRP直接結(jié)合在特異性的抗體上，無(wú)需引入橋抗，后者則需要三步，必需借助橋抗的連接且HRP是結(jié)合在非特異性的復(fù)合物上，染色步驟增多，導(dǎo)致背景染色加深。

(3 )高敏感性和高特異性

不同種系的IgG分子結(jié)構(gòu)是相似的，因此抗一種動(dòng)物的IgG可能與另一種動(dòng)物的IgG會(huì)引起交叉反應(yīng)。而DAKO EPOS法將一抗和檢測(cè)系統(tǒng)結(jié)合為一種試劑，避免了動(dòng)物間IgG的交叉反應(yīng)，從而提高了敏感性和特異性。

此外，DAKO EPOS試劑是即用型產(chǎn)品，無(wú)需進(jìn)行稀釋，且以使用方便的滴瓶提供，減少了抗體的污染，更適合在實(shí)際操作中的應(yīng)用。

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