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人TNF-α前體由233個(gè)氨基酸組成(26 kDa),其中包含由76個(gè)氨基酸殘基組成的信號(hào)肽,在TNF轉(zhuǎn)化酶TACE的作用下,切除信號(hào)肽,形成成熟的157個(gè)氨基酸殘基的TNF-α(17 kDa)。由于沒(méi)有蛋氨酸殘基,故不存在糖基化位點(diǎn),其中第69位和101位兩個(gè)半胱氨酸形成分子內(nèi)二硫鍵。人類 TNF-α與小鼠 TNF-α有79%氨基酸組成同源性,TNF-α的生物學(xué)作用似無(wú)明顯的種屬特異性。zui近有人報(bào)道通過(guò)基因工程技術(shù)表達(dá)了N端少2個(gè)氨基酸(Val、Arg)的155氨基酸人TNF-α,具有更好的生物學(xué)活性和抗腫瘤效應(yīng)。此外,還有用基因工程方法,將TNF-α分子氨基端7個(gè)氨基酸殘基缺失,再將8Pro、9Ser和10Asp改為8Arg、9Lys和10Arg,或者再同時(shí)將157Leu改為157Phe,改構(gòu)后的TNF-α比天然TNF體外殺傷L929細(xì)胞的活性增加1000倍左右,在體內(nèi)腫瘤出血壞死效應(yīng)也明顯增加。TNF-α和β發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)的天然形式是同源的三聚體。
腫瘤壞死因子(TNF)是一種具有廣泛生物學(xué)活性的細(xì)胞因子,主要由激活的單核-巨噬細(xì)胞所分泌,參與機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)與炎癥反應(yīng),也是某些感染性疾病和肝臟損傷的致病因素。正常人體液中的TNF水平一般在100pg/ml以下,當(dāng)患有某些疾病時(shí), TNF水平可有不同程度增高。因此,檢測(cè)患者體液中的TNF水平,具有一定的意義。
上海信帆科技有限公司試劑盒采用雙抗夾心酶聯(lián)免疫檢測(cè)法測(cè)定人血漿或血清中的TNF,用純化的人腫瘤壞死因子α(TNF-α)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入腫瘤壞死因子α(TNF-α),再與HRP標(biāo)記的腫瘤壞死因子α(TNF-α)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的腫瘤壞死因子α(TNF-α)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人腫瘤壞死因子α(TNF-α)濃度。
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