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影響ELISA實驗檢測的內(nèi)在因素有哪些,信帆生物為您解答!
內(nèi)源性物質(zhì)干擾解決方案:
有人認(rèn)為大約 40% 的人血清標(biāo)本中含有非特異性干擾物質(zhì),可以不同程度影響檢測結(jié)果。常見的干擾物質(zhì)有:類風(fēng)濕因子、補體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠 Ig (s) 抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)和其它物質(zhì)等。
(1)類風(fēng)濕因子 人血清中 IgM、IgG 型類風(fēng)濕因子(RF)可以與 ELISA 系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶標(biāo)記二抗的 FC 段直接結(jié)合,從而導(dǎo)致假陽性。解決的辦法是:用 F(ab)2 替代完整的 IgG、標(biāo)本用聯(lián)有熱變性(63℃,10 min)IgG 的固相吸附劑處理(將熱變性 IgG 加入到標(biāo)本稀釋液中同樣有效)、檢測抗原時,可以用 2-巰基乙醇等加入到標(biāo)本稀釋液中,使 RF 降解。信帆生物提供類風(fēng)濕因子ELISA試劑盒,咨詢!
(2)補體 ELISA 系統(tǒng)中固相一抗和標(biāo)記二抗過程中,抗體分子發(fā)生變構(gòu),其 FC 段的補體 C1q 分子結(jié)合位點被暴露出來,使 C1q 可以將二者連接起來,從而造成假陽性。解決的辦法是:用 EDTA 稀釋標(biāo)本、用 53℃,10 min 或 56℃,30 min 加熱血清使 C1q 滅活。
(3)嗜異性抗體 人類血清中含有能與嚙齒類動物(如鼠等)Ig (s) 結(jié)合的天然嗜異性抗體,可將 ELISA 系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來,也能造成假陽性。解決的辦法是:可在標(biāo)本稀釋液中加入過量的動物 Ig (s) ,但加入量不足或亞類不同時無效。
(4)嗜靶抗原的自身抗體 抗球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體,有時能與靶抗原結(jié)合形成復(fù)合物,在 ELISA 方法中均可干擾抗原抗體測定結(jié)果。為避免以上情況出現(xiàn),解決的辦法是:測定前需用理化方法將其解離后再測定。
(5)醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠 Ig (s) 抗體 開展的用鼠源性 CD3 等單克隆抗體治療,用放射性同位素標(biāo)記鼠源性抗體的影像診斷及靶向治療等新技術(shù),均有可能使這些病人體內(nèi)產(chǎn)生抗鼠抗體;另外,被 鼠等嚙齒類動物咬傷的病人體內(nèi)也可以產(chǎn)生抗鼠 Ig (s) 抗體。這些病人 ELISA 測定時均可產(chǎn)生假陽性。解決的辦法是:測定抗原時,在標(biāo)本中加入足量的正常鼠 Ig (s) ,從而克服由于上述原因造成的假陽性。
(6)交叉反應(yīng)物質(zhì) 類地gao辛、類 AFP 樣物質(zhì)等,是與靶抗原有交叉反應(yīng)的物質(zhì)。在用多抗測定抗原時對測定結(jié)果影響不大,但在用單克隆抗體測定抗原時,如果交叉抗原決定簇正好是所用單克隆抗體相對應(yīng)的靶決定簇時,也會出現(xiàn)假陽性結(jié)果。
(7)標(biāo)本中其它成分的影響 血清脂質(zhì)過高、膽紅素、血紅蛋白及血液粘度過大等,均對 ELISA 測定結(jié)果有干擾作用。
信帆生物公司主要代理產(chǎn)品:
ELISA試劑盒:進口ELISA試劑盒,國產(chǎn)ELISA試劑盒,人elisa試劑盒,大鼠ELISA試劑盒,小鼠ELISA試劑盒等。
培養(yǎng)基:微生物培養(yǎng)基,顯色培養(yǎng)基,BD培養(yǎng)基,gibco培養(yǎng)基等。
血清:胎牛血清,人血清,動物血清,NQBB,Hyclone,Gbico原裝血清 。
生物試劑:Amresco,Sigma,ABM,BIO-RAD,BD,ABCAM等進口試劑。
標(biāo)準(zhǔn)品對照品:進口對照品,進口對照藥材,進口標(biāo)準(zhǔn)品.
抗體:一抗,二抗,流式抗體等。
放免試劑盒:進口放免試劑盒,國產(chǎn)放免試劑盒,進口美國鳳凰等放免試劑盒。
實驗室代測服務(wù):放免代測,WB實驗,免疫組化代測,熒光定量PCR代測,病理細胞染色代測,生化實驗代測等。
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