信帆生物提供甲基化分析服務(wù)

DNA甲基化研究是表觀遺傳學(xué)的重要內(nèi)容，真核生物中的甲基化僅發(fā)生于胞嘧啶，即在DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶的作用下使CpG二核苷酸5’-端的胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)?’-甲基胞嘧啶。DNA甲基化通常抑制基因表達(dá)，去甲基化則誘導(dǎo)了基因的重新活化和表達(dá)。這種DNA修飾的方式在脊椎動(dòng)物的胚胎發(fā)育過(guò)程中起著重要的調(diào)控作用，參與多種疾病包括各種腫瘤的發(fā)病機(jī)理，是目前表觀遺傳學(xué)研究的熱點(diǎn)。

主要技術(shù)原理

用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA，則未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉(zhuǎn)化為尿嘧啶，而發(fā)生甲基化的胞嘧啶不變。根據(jù)某一待測(cè)位點(diǎn)或者調(diào)查的某一區(qū)域序列設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，通過(guò)PCR電泳、測(cè)序、熒光定量及質(zhì)譜等方法對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果分析哪些位點(diǎn)發(fā)生了甲基化及其甲基化的頻率。

主要服務(wù)方案

1、甲基化特異性的PCR（Methylation-specific PCR，MSP）
   用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA，所有未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉(zhuǎn)化為尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不變。設(shè)計(jì)針對(duì)某一待測(cè)位點(diǎn)的甲基化和非甲基化引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，通過(guò)電泳檢測(cè)MSP擴(kuò)增產(chǎn)物判定待測(cè)樣本是否存在甲基化位點(diǎn)。

2、亞硫酸氫鹽測(cè)序法（Bisulfite sequencing PCR，BSP）
   用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA，未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉(zhuǎn)化為尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不變。針對(duì)要調(diào)查的區(qū)域設(shè)計(jì)BSP引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序就可以判斷哪些CpG位點(diǎn)發(fā)生了甲基化；一般將PCR產(chǎn)物克隆后進(jìn)行測(cè)序成功率會(huì)比較高。

信帆生物提供甲基化分析服務(wù)

實(shí)驗(yàn)流程：

（1）BSP引物設(shè)計(jì)：針對(duì)感興趣的基因區(qū)域進(jìn)行BSP引物的設(shè)計(jì)（擴(kuò)增產(chǎn)物不超過(guò)400bp）

（2）亞硫酸氫鹽處理基因組DNA：提取基因組DNA并進(jìn)行亞硫酸氫鹽的轉(zhuǎn)化

（3）PCR擴(kuò)增目的片段：BSP引物擴(kuò)增感興趣的區(qū)域

（4）克隆到載體：將PCR產(chǎn)物純化后連接到載體上

（5）克隆測(cè)序：挑取陽(yáng)性菌斑，提取質(zhì)粒并測(cè)序（通常測(cè)序5個(gè)或10個(gè)克隆）

（6）序列分析：對(duì)測(cè)序的結(jié)果進(jìn)行比對(duì)和甲基化分析

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